Contatore di cellule
Al contatore di cellule: Cellule HT1080
La linea cellulare di fibrosarcoma HT1080 è stata generata nel 1972 da tessuto bioptico tumorale. L’aspetto interessante è che il paziente non era stato sottoposto a radioterapia o chemioterapia al momento della biopsia, per cui le cellule non presentano i tipi di mutazioni indesiderate comunemente causate da questi trattamenti. Poiché le cellule HT1080 sono altamente invasive, vengono spesso utilizzate come modelli per l’invasione e la migrazione cellulare. I ricercatori sono riusciti a identificare una serie di potenziali agenti terapeutici antitumorali sulla base della loro capacità di inibire il comportamento invasivo delle cellule HT1080.
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Figura 1: Imaging della migrazione cellulare
Il saggio di migrazione cellulare Oris™ Pro di Platypus Technologies è stato utilizzato per misurare la migrazione delle cellule HT1080 trattate con citocalasina D (sinistra) o con DMSO come controllo (destra). In questo saggio viene adoperato un gel biocompatibile non tossico (Biocompatible Gel BCG) per formare una zona priva di cellule sulle superfici di coltura. Dopo che le cellule sono state seminate nella piastra a 96 pozzetti, il BCG si scioglie, permettendo alle cellule di migrare al centro dei pozzetti (area indicata dai cerchietti gialli). Le immagini dei risultati sono state acquisite con il citometro per imaging SpectraMax MiniMax 300 e le cellule che sono migrate al centro dei pozzetti sono state contate utilizzando la funzione del software SoftMax Pro per la selezione della regione di interesse (Region Of Interest, ROI).
Figura 2: Conte cellulari con la tecnologia StainFree
Immagini di cellule HT1080 acquisite con il citometro per imaging SpectraMax MiniMax 300. Le cellule sono state identificate utilizzando l’impostazione di analisi predefinita “CellsD”. A sinistra è mostrata l’immagine originale in luce trasmessa e a destra è visibile la stessa immagine con maschere viola che indicano le cellule identificate dal software.
Figura 3: Quantificazione della migrazione cellulare
Le cellule sono state trattate con citocalasina D e quelle che sono successivamente migrate al centro dei pozzetti sono state contate utilizzando la tecnologia StainFree (cerchietti blu) o l’analisi delle cellule fluorescenti (cerchietti verdi). I valori EC50 per la citocalasina D sono risultati pari a, rispettivamente, 0,13 µM e 0,15 µM, confermando che non è necessario colorare le cellule per valutare in maniera accurata la migrazione cellulare con il saggio Oris Pro.
Kit di strumenti per l’analisi delle cellule HT1080
- Piattaforma di rilevazione per micropiastre multimodale SpectraMax ® i3
- Citometro per imaging SpectraMax ® MiniMax™ 300
- Software SoftMax ® Pro
Impostazione dello strumento
Tipo di analisi: Analisi di oggetti distinti
Lunghezza d’onda per l’identificazione di oggetti: TL
Informazione sulla tecnologia di rilevazione cellulare StainFree
Solitamente, i saggi di imaging basati su cellule richiedono l’uso di sonde fluorescenti che possono essere tossiche per le cellule vive o funzionare soltanto in cellule fissate. Un metodo senza marcatura per l’analisi delle conte cellulari e della confluenza cellulare permette ai ricercatori di monitorare in maniera quantitativa la proliferazione e la salute delle cellule senza dover ricorrere a flussi di lavoro laboriosi che potrebbero compromettere la vitalità cellulare.
La piattaforma per micropiastre multimodale SpectraMax i3 con citometro per imaging MiniMax 300 utilizza l’esclusiva tecnologia di rilevazione cellulare StainFree con brevetto depositato per permettervi di eseguire saggi di proliferazione cellulare, di citotossicità e di altro tipo senza coloranti nucleari come il DAPI, che si intercala nel DNA, o coloranti per cellule vive, che a lungo termine sono in realtà tossici per le cellule.