Contatore di cellule
Al contatore di cellule: Cellule endoteliali di aorta di tratto
Le cellule endoteliali di aorta di ratto sono state utilizzate in una varietà di ricerche scientifiche, tra cui studi sull’adesione cellula-cellula, sulla migrazione, sull’angiogenesi e sulle vie di segnalazione cellulare coinvolte nella funzione endoteliale in condizioni fisiologiche e patologiche. Poiché si tratta di cellule primarie, il loro uso nello screening di farmaci può essere complicato. L’imaging su cellule vive e la misurazione della confluenza cellulare prima di eseguire un saggio possono essere cruciali per il successo dell’esperimento.
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Figura 1. Immagini in luce trasmessa di cellule endoteliali dell’aorta di ratto
L’immagine mostra la gamma di morfologie e di processi cellulari visibile in una singola coltura primaria.
Figura 2. Conta di cellule endoteliali di aorta di ratto con la tecnologia StainFree
Immagini di cellule endoteliali di aorta di ratto acquisite con il citometro per imaging SpectraMax i3 MiniMax 300. Le cellule sono state identificate utilizzando un’impostazione di analisi personalizzata. A sinistra sono mostrate le immagini originali in luce trasmessa (in alto, coltura a densità superiore; in basso, coltura a densità inferiore) e a destra sono visibili le stesse immagini con maschere viola che indicano le cellule identificate dal software.
Le immagini sono state generosamente fornite dalla dott.ssa Virginia Huxley dell’Università del Missouri, Columbia, MO, Stato Uniti, con l’aiuto del nostro field application scientist, Randy Milano.
Suggerimento:
La citometria per imaging delle cellule endoteliali di aorta di ratto può essere problematica perché le cellule sono alquanto piatte, presentano una varietà di morfologie diverse e talvolta sono provviste di lunghi processi che ricordano quelli neuronali, come mostrato nella Figura 1. È in casi del genere che l’algoritmo di apprendimento automatico supervisionato utilizzato nella tecnologia StainFree si rivela realmente utile. Nelle impostazioni per l’analisi delle immagini, scegliete l’opzione “Create New Setting” (Crea nuova impostazione) e concentrate il vostro disegno sulla parte centrale delle cellule, ignorando i processi cellulari. È importante includere un certo numero di cellule rappresentative delle diverse morfologie per ottenere risultati simili a quelli rappresentati nella Figura 2.
Consiglio utile: impostando la regolazione del fuoco su un valore più negativo, è possibile ottenere immagini più nitide di queste cellule, facilitandone la conta da parte del software.
Kit di strumenti per l’analisi delle cellule endoteliali di aorta di ratto
- Piattaforma di rilevazione per micropiastre multimodale SpectraMax ® i3
- Citometro per imaging SpectraMax ® MiniMax™ 300
- Software SoftMax ® Pro
Impostazione dello strumento
Esposizione: 7 ms
Regolazione del fuoco: -455 µm (può essere ottimizzata in base alle caratteristiche delle cellule utilizzate)
Tipo di analisi: Analisi di oggetti distinti
Lunghezza d’onda per l’identificazione di oggetti: TL
Informazione sulla tecnologia di rilevazione cellulare StainFree
Solitamente, i saggi di imaging basati su cellule richiedono l’uso di sonde fluorescenti che possono essere tossiche per le cellule vive o funzionare soltanto in cellule fissate. Un metodo senza marcatura per l’analisi delle conte cellulari e della confluenza cellulare permette ai ricercatori di monitorare in maniera quantitativa la proliferazione e la salute delle cellule senza dover ricorrere a flussi di lavoro laboriosi che potrebbero compromettere la vitalità cellulare.
La piattaforma per micropiastre multimodale SpectraMax i3 con citometro per imaging MiniMax 300 utilizza l’esclusiva tecnologia di rilevazione cellulare StainFree con brevetto depositato per permettervi di eseguire saggi di proliferazione cellulare, di citotossicità e di altro tipo senza coloranti nucleari come il DAPI, che si intercala nel DNA, o coloranti per cellule vive, che a lungo termine sono in realtà tossici per le cellule.