Crescita neuritica
Ottenete informazioni preziose per l’interpretazione della neurobiologia, dalla valutazione dei neuroni derivati da iPSC all’analisi degli organoidi neuronali 3D.
Semplificazione della caratterizzazione dei neuroni mediante saggi di crescita neuritica per studiare lo sviluppo neuronale e la degenerazione 𝘪𝘯 𝘷𝘪𝘵𝘳𝘰
I neuroni creano connessioni tramite estensioni del loro corpo cellulare note come assoni e dendriti, che vengono comunemente chiamate “neuriti” o “processi”. Questo fenomeno biologico è denominato crescita neuritica ed è regolato da complessi eventi di segnalazione intracellulare.
L’analisi della crescita neuritica è un saggio comunemente utilizzato per studiare lo sviluppo dei neuroni e la degenerazione neuronale in vitro. Lo sviluppo di neuriti richiede una complessa interazione di segnali extracellulari e intracellulari. La crescita di neuriti può essere stimolata o inibita da fattori neurotrofici. Un aspetto importante è che lo sviluppo dei neuroni può essere influenzato da sostanze chimiche neurotossiche.
La comprensione dei meccanismi di segnalazione che determinano la crescita neuritica fornisce informazioni preziose per l’interpretazione delle risposte neurotossiche e dei dati di screening dei composti e per la conoscenza dei fattori che influiscono sullo sviluppo e sulla rigenerazione neurale. L’inibizione o la stimolazione della crescita neuritica è coinvolta in un’ampia gamma di danni o disturbi del SNC, compresi ictus, morbo di Parkinson, morbo di Alzheimer e lesioni al midollo spinale.
Soluzione per il flusso di lavoro per l’analisi della crescita neuritica
La crescita neuritica viene valutata mediante la segmentazione e quantificazione dei processi neuronali. Questi processi neuronali possono essere visualizzati utilizzando un microscopio a fluorescenza e quantificati mediante tracciamento e conteggio manuale in applicazioni a basso rendimento. Tuttavia, nel caso di campioni in un formato a più alto rendimento come le micropiastre, la soluzione più efficiente è rappresentata da un sistema di imaging automatizzato abbinato a un software di analisi.
Questo flusso di lavoro illustra un processo semplificato per l’analisi della crescita neuritica e indica i sistemi che possono aiutarvi a semplificare le vostre attività di ricerca e aumentare il rendimento.
- Coltivare le cellule neuronali: le cellule vengono coltivate in modo che formino reti neuritiche in micropiastre a 96 o 384 pozzetti.
- Trattare con composti: le cellule vengono quindi esposte a composti tossici per 48 ore.
- Colorare per marcatori: dopo il completamento del trattamento del composto, possono essere aggiunti coloranti per cellule vive direttamente nel terreno di coltura. Dopo la fissazione delle cellule è anche possibile eseguire protocolli di immunocolorazione con anticorpi coniugati in fluorescenza.
- Acquisire immagini neuronali: applicazioni di imaging ad alto contenuto dei neuroni permettono ai ricercatori di caratterizzare e misurare le alterazioni che si verificano nelle reti neuronali, come ad esempio il numero, la lunghezza e la ramificazione dei neuriti, nonché di determinare reazioni di tossicità generale o specifica. L’acquisizione di immagini mediante sistemi ottici che presentano un campo visivo ampio permette di campionare un maggior numero di cellule analizzando meno siti per pozzetto, con una notevole velocizzazione dei tempi di acquisizione delle piastre.
- Analizzare la rete neuronale: l’analisi ad alto contenuto offre un metodo quantitativo per determinare gli effetti dei fattori positivi e negativi sulla crescita neuritica. L’uso di un software di analisi per imaging cellulare permette di eseguire un’analisi quantitativa delle immagini delle cellule neuronali per caratterizzare svariati parametri, tra cui il numero di processi per cellula, la lunghezza e la ramificazione dei neuriti e il numero di cellule.
Applicazioni e saggi di crescita neuritica
Applicazioni di imaging ad alto contenuto dei neuroni permettono agli scienziati di caratterizzare e misurare le alterazioni che si verificano nelle reti neuronali, come ad esempio il numero, la lunghezza e la ramificazione dei neuriti, nonché di determinare reazioni di tossicità generale o specifica.
Scoprite come acquisire e quantificare in modo rapido e accurato le attività neuronali mediante l’uso di sistemi automatizzati di microscopia e software di analisi ad alto contenuto: