Flusso di lavoro: Produzione di plasmidi
 
Assemblaggio

Assemblaggio

Il gene target (gene di interesse) viene sottoposto a ligazione con un vettore con caratteristiche desiderabili, formando un plasmide ricombinante. Ciò e attuabile con diverse tecniche, tra cui l’assemblaggio Gibson o l’assemblaggio Golden Gate.

Flusso di lavoro dell’assemblaggio
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Trasformare
Trasformare il flusso di lavoro

Trasformare

I prodotti della ligazione vengono introdotti in cellule batteriche competenti, consentendo l’assorbimento microbico del plasmide ingegnerizzato e la produzione di copie multiple del plasmide.

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Semina in piastre e screening delle colonie

Semina in piastre e screening delle colonie

Le cellule microbiche vengono disseminate su piastre di agar solido in modo che crescano in colonie individuali, che vengono poi selezionate per identificare quelle con le caratteristiche desiderate per il prelievo.

Semina in piastre e screening delle colonie
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>Sistema di prelievo di colonie microbiche QPix

Sistema di prelievo di colonie microbiche QPix

Prelievo di colonie

Prelievo di colonie

Una volta identificate le colonie desiderate, queste possono essere prelevate da piastre di agar solido e trasferite in terreni liquidi per la crescita e l’incubazione notturna

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Incubazione notturna

Incubazione notturna

Le piastre di crescita con il terreno liquido vengono sigillate e trasferite in incubatori ad agitazione per consentire ai microbi di dividersi, producendo più copie del plasmide ricombinante.

Incubazione notturna
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aggiunta del substrato
aggiunta del substrato

Mini Prep

I microbi vengono lisati per estrarre i plasmidi ricombinanti. I plasmidi vengono poi purificati con metodi a colonna o a microsfere per ottenere un DNA altamente puro

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