Kit per la cardiotossicità EarlyTox
Il kit per la cardiotossicità EarlyTox™ offre un metodo rapido, semplice e affidabile, basato sulla fluorescenza, per identificare composti cardiotossici in un saggio biologicamente rilevante utilizzando cardiomiociti derivati da cellule staminali. Sfruttando la nostra tecnologia di mascheramento prioritaria con il nostro nuovo indicatore sensibile al calcio, i ricercatori possono:
- Scartare i composti cardiotossici e identificare potenziali farmaci candidati
- Misurare 384 campioni in minuti invece che in ore
- Ridurre al minimo l’effetto aspecifico del colorante sulle caratteristiche di battito
- Ridurre la variabilità tra pozzetti e migliorare la qualità dei dati
- Usufruire del più ampio intervallo dinamico del segnale disponibile
- Confrontare sostanze rispetto a tre composti di riferimento: isoproterenolo, sotalolo e propranololo
Dati sul kit per la cardiotossicità EarlyTox
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Confronto tra l’effetto di composti di riferimento sul battito dei cardiomiociti
(A) Variazione del segnale del calcio in cardiomiociti non trattati derivati da iPSC, incubati per due ore con il colorante per la cardiotossicità EarlyTox, come indicato dai picchi del calcio. (B) Il propranololo rallenta la frequenza dei picchi del calcio nelle cellule derivate da iPSC. (C) L’isoproterenolo aumenta la frequenza dei picchi del calcio nei cardiomiociti derivati da iPSC. (D) Il sotalolo rallenta la frequenza dei picchi del calcio nei cardiomiociti derivati da iPSC e altera il pattern normale.
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Confronto della frequenza di battito
La frequenza di battito è stata registrata durante un periodo di quattro ore. Con il colorante per la cardiotossicità EarlyTox è stata rilevata la frequenza di battito più alta in tutti i pozzetti.
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Impatto del colorante sull’ampiezza generale dei picchi
Con il colorante per la cardiotossicità EarlyTox è stata rilevata la massima ampiezza media dei picchi nel tempo. Il segnale associato agli altri coloranti è diminuito nel tempo.
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Confronto dell’impatto del colorante sul battito dei cardiomiociti nel tempo
Sono stati confrontati trentaquattro pozzetti di controllo contenenti ciascun colorante per un periodo di quattro ore. Le cellule in tutti i pozzetti contenenti il colorante per la cardiotossicità EarlyTox hanno continuato a battere per un periodo fino a quattro ore. Il silenziamento si è verificato molto prima nei pozzetti trattati con Fluo-4 Direct e in quelli trattati con il kit FLIPR Calcium 5, in cui il battito è quasi completamente sparito entro quattro ore.
Tecnologia del kit per la cardiotossicità EarlyTox
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I kit per la cardiotossicità EarlyTox™ offrono una soluzione omogenea per prevedere la tossicità e l’efficacia dei composti
I kit per la cardiotossicità EarlyTox utilizzano un colorante sensibile al calcio che viene assorbito nel citoplasma delle cellule durante l’incubazione. Quando il colorante si lega agli ioni calcio nel citoplasma cellulare, l’intensità della fluorescenza aumenta, permettendo di misurare qualsiasi variazione nella concentrazione del calcio. La tecnologia di mascheramento non entra nella cellula, ma riduce la fluorescenza di fondo extracellulare. Ciò contribuisce a migliorare la finestra del segnale del saggio, consentendo di ottenere maggiori dettagli sui pattern di battito.
Ruolo del calcio nel meccanismo di contrazione-rilassamento dei cardiomiociti
Il kit per la cardiotossicità EarlyTox può essere utilizzato per caratterizzare l’impatto di composti farmacologici sulla frequenza dei picchi (BPM), sull’ampiezza dei picchi e sul pattern di battito, ed è progettato per essere adoperato con cardiomiociti derivati da cellule staminali o con cardiomiociti primari. La frequenza dei picchi è determinata dalle variazioni della concentrazione del calcio intracellulare, monitorata mediante il colorante per la cardiotossicità EarlyTox. Il ruolo del calcio nella contrazione-rilassamento dei cardiomiociti include: 2,1. Si verifica la depolarizzazione della membrana, i canali del calcio si aprono e il calcio entra nel citosol. 2,2. Il calcio intracellulare provoca il rilascio di calcio dal reticolo sarcoplasmatico. 2,3. Il calcio citoplasmatico si lega alla troponina, attivando il sarcomero. 2,4. Si verifica la contrazione dei cardiomiociti. 2,5. Hanno luogo la rimozione del calcio mediante trasporto attivo nel reticolo sarcoplasmatico e lo scambio di calcio con il fluido extracellulare. 2,6. Il ciclo si ripete.
Risorse del kit per la cardiotossicità EarlyTox
Nota applicativa
Saggio per il flusso di calcio per studi di neurotossicità in vitro e screening farmacologico
Calcium flux assay for in vitro neurotoxicity studies and drug screening
L’imaging del calcio, o monitoraggio delle variazioni del calcio intracellulare, è una tecnica estremamente utile per studiare gli svariati ruoli degli ioni calcio nei neuroni funzionali.…
eBook
Saggi ottimizzati per ricerche all’avanguardia
Optimized Assays for Breakthrough Research
La ricerca biologica è stata notevolmente semplificata dagli strumenti, dai protocolli e dai kit di saggi standardizzati resi disponibili dai produttori commerciali.
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Nota applicativa
Saggi multiparametrici per cardiomiociti su una singola piattaforma
Multiparametric assays for cardiomyocytes on a single platform
Recentemente, è stato dimostrato che le variazioni del flusso di calcio intracellulare associate alle contrazioni dei cardiomiociti possono essere monitorate su un lettore per piastre con imaging per fluorescenza (FLIPR Tetra…
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Nota applicativa
Il kit per la cardiotossicità EarlyTox fornisce dati biologicamente rilevanti sulla cardiotossicità in una fase più precoce del processo di scoperta farmacologica
EarlyTox Cardiotoxicity Kit provides biologically relevant cardiotoxicity data earlier in the drug discovery process
Il kit per la cardiotossicità EarlyTox contiene un nuovo colorante sensibile al calcio e una tecnologia di mascheramento proprietaria ottimizzati per la misurazione di variazioni dei livelli di calcio citoplasmatico associate…
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Nota applicativa
Effetti dei composti sui transienti di calcio in cardiomiociti umani derivati da cellule iPSC Cor.4U battenti di Axiogenesis
Compound effects upon calcium transients in beating Axiogenesis Cor.4U human iPS cell-derived cardiomyocytes
La valutazione della cardiotossicità è rilevante negli stadi precoci della scoperta farmacologica per consentire l'eliminazione di composti potenzialmente tossici dall'ulteriore sviluppo. Ciò è critico per…
Nuovi strumenti di saggio in vitro per la tossicità cardiaca e la scoperta
