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Panoramica dei saggi IMAP per enzimi

Basato sull’interazione specifica ad alta affinità dei gruppi fosfato con nanoparticelle (biglie) contenenti metalli trivalenti, il saggio IMAP è una piattaforma generica non basata su anticorpi per la valutazione dell’attività chinasica, fosfatasica e fosfodiesterasica. Viene eseguita una reazione enzimatica utilizzando un substrato marcato in fluorescenza. L’aggiunta del sistema di legame IMAP arresta la reazione enzimatica e inizia il legame delle biglie ai substrati fosforilati. Il legame del substrato alle biglie, che è correlato all’attività enzimatica, può essere rilevato utilizzando come letture la PF o la TR-FRET.

Sistema di legame progressivo IMAP

Substrati IMAP

Dati sui saggi IMAP

  • Esempi di dati IMAP: curva di diluizione di ROCKII

    Esempi di dati IMAP PF: curva di diluizione di ROCKII

    Curve di diluizione enzimatica per ROCKII in tampone di reazione IMAP contenente BSA e Tween utilizzando il sistema di legame progressivo. Condizioni di reazione: chinasi ROCKII (Upstate: 14-451) come indicato, substrato derivato da FAM-S6 100 nM (5FAM-AKRRRLSSLRA-COOH, R7184), ATP 100 µM. Condizioni della soluzione di legame IMAP: 100% di tampone di legame A, reagente di legame progressivo 1:400.

  • Confronto tra rilevazione mediante PF e TR-FRET

    Inibizione di Akt con staurosporina: confronto tra la modalità di rilevazione IMAP TR-FRET (in alto) e IMAP PF (in basso). Condizioni di reazione: Chinasi Akt (0,1 u/ml, Upstate: 14-276), FAM-Crosstide (5FAM-GRPRTSSFAEG-COOH, R7110) 300 nM, 1 µM, 3 µM, ATP 10 µM, staurosporina come indicato. Soluzione di legame IMAP: 40% di tampone di legame A, 60% di tampone di legame B, reagente di legame progressivo 1:400.

    Confronto tra rilevazione mediante PF e TR-FRET

Tecnologia dei saggi IMAP per enzimi

  • Saggi generici IMAP PF per chinasi e fosfatasi

    Saggi generici IMAP PF per chinasi e fosfatasi

    Principio del saggio IMAP utilizzando la lettura di PF: la soluzione di legame viene aggiunta dopo la reazione della chinasi che utilizza un peptide marcato in fluorescenza. Il piccolo substrato fluorescente fosforilato si lega alle grandi nanoparticelle a base di M(III), per cui si verifica una riduzione della velocità rotazionale del substrato e un conseguente aumento della sua polarizzazione.

    Saggi generici IMAP PF per fosfodiesterasi

    Saggi generici IMAP PF per fosfodiesterasi

    Principio del saggio IMAP utilizzando la lettura di PF: la soluzione di legame viene aggiunta dopo la reazione della fosfodiesterasi che utilizza un substrato marcato in fluorescenza. Il piccolo substrato fluorescente fosforilato si lega alle grandi nanoparticelle a base di M(III), per cui si verifica una riduzione della velocità rotazionale del substrato e un conseguente aumento della sua polarizzazione.

  • Saggi generici IMAP TR-FRET per chinasi e fosfatasi

    Saggi generici IMAP TR-FRET per chinasi e fosfatasi

    Principio del saggio IMAP utilizzando la lettura di TR-FRET: la soluzione di legame viene aggiunta dopo la reazione della chinasi che utilizza una proteina o un peptide marcato in fluorescenza. In questo sistema, la nanoparticella viene addizionata con una molecola donatrice di terbio (Tb). Legandosi a queste nanoparticelle a base di M(III), il substrato fluorescente fosforilato si avvicina al donatore di Tb, per cui è possibile misurare il TR-FRET tra il donatore di Tb e il substrato fluorescente fosforilato.

    Saggi generici IMAP TR-FRET per fosfodiesterasi

    Saggi generici IMAP TR-FRET per fosfodiesterasi

    Principio del saggio IMAP utilizzando la lettura di TR-FRET: la soluzione di legame viene aggiunta dopo la reazione della fosfodiesterasi che utilizza un substrato marcato in fluorescenza. In questo sistema, la nanoparticella viene addizionata con una molecola donatrice di terbio (Tb). Legandosi a queste nanoparticelle a base di M(III), il substrato fluorescente fosforilato si avvicina al donatore di Tb, per cui è possibile misurare il TR-FRET tra il donatore di Tb e il substrato fluorescente fosforilato.

Opzioni per ordinare i saggi IMAP per enzimi

Kit del saggio IMAP

Kit dimostrativo di valutazione IMAP - PN: R8166

Kit dimostrativo di valutazione IMAP
Kit IMAP ottimizzato per 800 punti dati, che include calibratori (peptidi fosforilati e non fosforilati) per eseguire una curva di calibrazione per la rilevazione mediante PF o TR-FRET

#R8166

$779.00 USD

1

Kit di valutazione IMAP TR-FRET (con sistema di legame progressivo) - PN: R8161

Kit di valutazione IMAP TR-FRET con sistema di legame progressivo
Protocollo ottimizzato per 800 punti dati per eseguire il saggio IMAP con sistema di legame progressivo; sono necessari chinasi e substrato aggiuntivi

#R8161

$779.00 USD

1

Kit di valutazione IMAP PF PDE - PN: R8175

Kit di valutazione IMAP PF PDE

#R8175

$1,427.00 USD

1

Kit di valutazione IMAP TR-FRET PDE (con substrati cAMP e cGMP) - PN: R8176

Kit di valutazione IMAP TR-FRET PDE
Include un protocollo ottimizzato e i substrati cAMP e cGMP; il cliente deve utilizzare il proprio enzima PDE

#R8176

$1,427.00 USD

1

Risorse dei saggi IMAP per enzimi