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Panoramica dei kit di saggi del potenziale di membrana FLIPR

Ogni kit di saggio omogeneo utilizza una combinazione proprietaria di un colorante indicatore e un quencher per massimizzare l’applicabilità per i composti/canali/linee cellulari, eliminando nel contempo le cause di variabilità dei dati. Questa formula esclusiva risponde 10 volte più rapidamente e presenta una maggiore stabilità termica rispetto ai coloranti tradizionali, fornendo dati di screening di alta qualità che mostrano una buona correlazione con i saggi di patch-clamp manuali.

Poiché l’attività dei canali ionici è altamente sensibile e potenzialmente influenzata da lievi alterazioni chimiche, sono disponibili due kit di saggi del potenziale di membrana FLIPR® (rosso e blu) per selezionare le condizioni ottimali per i vostri delicati canali ionici target. Entrambe le formulazioni utilizzano la tecnologia di quenching proprietaria di Molecular Devices per migliorare le finestre del segnale e produrre punteggi Z accettabili per lo screening di una varietà di target, tra cui TRP e canali dipendenti da ligandi, dal voltaggio e da nucleotidi ciclici.

A differenza dei coloranti tradizionali come il DiBAC, il kit del saggio del potenziale di membrana FLIPR rileva variazioni di gradiente bidirezionali, per cui è possibile monitorare le condizioni sia della variabile che del controllo in un singolo esperimento. Vi consigliamo di valutare entrambi i kit di saggi per stabilire quale formulazione sia più adatta al vostro target.

Dati sui kit di saggi del potenziale di membrana FLIPR

  • Confronto tra patch-clamp e saggi del potenziale di membrana FLIPR

    Confronto tra i dati ottenuti mediante patch-clamp e mediante i kit di saggi del potenziale di membrana FLIPR

    Il metodo di patch-clamp manuale è in grado di rilevare risposte rapide, permettendo di individuare variazioni molto veloci del potenziale di membrana. Il confronto tra i dati ricavati utilizzando i kit di saggi del potenziale di membrana FLIPR e i risultati ottenuti mediante il metodo di patch-clamp manuale evidenzia una buona correlazione (Figure 1 e 2). È possibile osservare sia l’apertura che la chiusura del canale ionico. Ciò costituisce una differenza rispetto al DiBAC, che permette di rilevare soltanto variazioni unidirezionali del potenziale di membrana (Figura 3).

    Confronto tra patch-clamp (mV) e saggi del potenziale di membrana FLIPR (fluorescenza) in cellule CHO che esprimono un canale del K+ voltaggio-dipendente. Dati per gentile concessione di Michael Xie, Millenium Pharmaceuticals.

  • Confronto tra fluorescenza e variazione del potenziale di membrana

    Correlazione tra le variazioni del potenziale di membrana e i risultati dei saggi in fluorescenza sullo strumento FLIPR: cellule CHO trasfettate con canali del K+ sono state esposte a varie concentrazioni di potassio. Dati per gentile concessione di Michael Xie, Millenium Pharmaceuticals.

    Confronto tra fluorescenza e variazione del potenziale di membrana

  • Confronto dei risultati ottenuti su canali del calcio ligando-dipendenti

    Confronto dei risultati ottenuti su canali del calcio ligando-dipendenti

    Confronto tra il kit del saggio del potenziale di membrana FLIPR e saggi basati su DiBAC e Fluo-3 su canali del Ca2+ ligando-dipendenti. Dati per gentile concessione di Michael Xie, Millenium Pharmaceuticals.

  • Due formulazioni disponibili per il quencher del kit del potenziale di membrana

    Poiché l’attività dei canali ionici è sensibile all’interferenza e l’interferenza chimica per un determinato canale ionico è altamente imprevedibile, i kit di saggi del potenziale di membrana FLIPR sono disponibili in due formulazioni. Entrambe le formulazioni combinano i vantaggi del nostro colorante indicatore del potenziale di membrana proprietario e della nostra tecnologia di quenching brevettata. Una formulazione utilizza un quencher blu e l’altra un quencher rosso. Vi consigliamo di valutare entrambe le versioni per ciascun singolo target/linea cellulare per stabilire quale formulazione fornisca prestazioni ottimali.

    Modulazione del canale Nav1.5 in cellule CHL-hH1 da parte della tetrodotossina. In questo saggio è stata utilizzata veratridina 30 mM per mantenere il canale del sodio nello stato aperto. La modulazione avviene quando aumenta la concentrazione di tetrodotossina. Si verifica un rapido afflusso di Na+ nella cellula, con conseguente depolarizzazione della membrana, che determina un aumento della fluorescenza. In questo saggio, il kit del potenziale di membrana rosso ha evidenziato la finestra del segnale più ampia e il fattore Z maggiore.

    Modulazione di un canale Nav1.5

Tecnologia dei kit di saggi del potenziale di membrana FLIPR

  • L’intensità della fluorescenza varia con l’aumento o la diminuzione del potenziale della membrana cellulare

    L’intensità della fluorescenza varia con l’aumento o la diminuzione del potenziale della membrana cellulare

    I kit di saggi del potenziale di membrana FLIPR permettono di rilevare la modulazione dei canali ionici mediante l’aumento o la diminuzione del segnale fluorescente al variare del potenziale della membrana cellulare. L’intensità del segnale fluorescente aumenta durante la depolarizzazione della membrana perché il colorante segue gli ioni carichi positivamente all’interno della cellula. Durante l’iperpolarizzazione della membrana, l’intensità del segnale fluorescente diminuisce poiché il colorante segue gli ioni carichi positivamente all’esterno della cellula. Questi kit sono particolarmente adatti per l’uso con la funzionalità di pipettamento e lettura simultanei del sistema FLIPR® Tetra e dei lettori per micropiastre FlexStation® 3 per cogliere la cinetica rapida associata all’attivazione dei canali ionici.

    I kit utilizzano un colorante di quenching per ridurre la fluorescenza di fondo e migliorare il rapporto segnale/rumore. La tecnologia di quenching brevettata (numero di brevetto USA 6.420.183, numero di brevetto EPO 0 906 572) viene offerta in esclusiva da Molecular Devices ai ricercatori nel campo della scoperta farmacologica e delle scienze naturali attraverso l’acquisto di kit di saggi FLIPR.

Opzioni per ordinare i kit di saggi del potenziale di membrana FLIPR

Kit di saggio del potenziale di membrana FLIPR

Kit di valutazione – PN: R8128

  • (5) flaconcini di componente A* per il saggio blu
  • (5) flaconcini di componente A* per il saggio rosso
  • (1) flacone di tampone del saggio 1X (componente B)

* Ogni flaconcino di reagente (componente A) è sufficiente per 1 piastra (96, 384, 1536 pozzetti). Ogni kit è sufficiente per 10 piastre.

#R8128

$671.00 USD

1

Kit di esame ROSSO - PN: R8126

  • (10) flaconcini di componente A*
  • (1) flacone di tampone del saggio 1X (componente B)

* Ogni flaconcino di reagente (componente A) è sufficiente per 1 piastra (96, 384, 1536 pozzetti). Ogni kit è sufficiente per 10 piastre.

#R8126

$671.00 USD

1

Kit di materiale sfuso ROSSO - PN: R8123

  • (10) flaconcini di componente A*
  • (1) flacone di tampone del saggio 10X (componente B)

* Ogni flaconcino di reagente (componente A) è sufficiente per 10 piastre (96, 384, 1536 pozzetti). Ogni kit è sufficiente per 100 piastre.

#R8123

$3,426.00 USD

1

Kit di esame BLU - PN: R8042

  • (10) flaconcini di componente A*
  • (1) flacone di tampone del saggio 1X (componente B)

* Ogni flaconcino di reagente (componente A) è sufficiente per 1 piastra (96, 384, 1536 pozzetti). Ogni kit è sufficiente per 10 piastre.

#R8042

$671.00 USD

1

Kit di materiale sfuso BLU - PN: R8034

  • (10) flaconcini di componente A*
  • (1) flacone di tampone del saggio 10X (componente B)

* Ogni flaconcino di reagente (componente A) è sufficiente per 10 piastre (96, 384, 1536 pozzetti). Ogni kit è sufficiente per 100 piastre.

#R8034

$3,426.00 USD

1

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