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Kit del saggio di captazione degli acidi grassi QBT

I protocolli convenzionali per il monitoraggio della captazione degli acidi grassi basati sulla radioattività spesso richiedono la lisi cellulare e il processamento a temperatura molto bassa, caratteristiche che li rendono costosi, lenti e non adatti per lo screening ad alto rendimento. Altri protocolli basati sulla fluorescenza generalmente richiedono l’uso di un separatore cellulare attivato dalla fluorescenza (Fluorescence-Activated Cell Sorter, FACS) a basso rendimento oppure prevedono il lavaggio delle cellule, che può compromettere gravemente l’integrità dei fragili adipociti adoperati in questi saggi.

Il saggio di captazione degli acidi grassi QBT utilizza il BODIPY®-acido dodecanoico, un analogo fluorescente degli acidi grassi, accoppiato con la nostra tecnologia di quenching proprietaria. La marcatura con BODIPY fornisce un analogo ideale degli acidi grassi a catena lunga che si comporta come gli acidi grassi naturali ed è un substrato noto dei trasportatori di acidi grassi.

  • Saggio in formato omogeneo in un unico passaggio, che permette di eseguire screening ad alto rendimento
  • Saggio in fluorescenza con tecnologia di quenching proprietaria, che consente agli utenti di monitorare in tempo reale la cinetica di captazione in cellule vive
  • Sostituisce i complessi e laboriosi protocolli dei saggi basati sulla fluorescenza e sulla radioattività
  • L’assenza di composti radioattivi riduce i costi di smaltimento ed elimina i rischi di sicurezza associati ai saggi basati sulla radioattività

Dati sul kit del saggio di captazione degli acidi grassi QBT

  • Confronto tra fibroblasti e adipociti

    Confronto tra fibroblasti e adipociti

    Adipociti 3T3 L1 sono stati seminati a una densità di 50.000 cellule/pozzetto in 100 µl di DMEM/FBS in una piastra a 96 pozzetti e incubati a 37 °C per 5 ore. Il terreno di coltura è stato poi sostituito con la soluzione per la captazione degli acidi grassi. Sono state iniziate immediatamente letture cinetiche con un lettore FlexStation® 3 Molecular Devices. A: adipociti; B: fibroblasti; C: nessuna cellula (solo reagente di captazione).

  • Confronto tra fibroblasti e adipociti; curva dose-risposta per l’insulina

    Adipociti 3T3 L1 sono stati seminati a una densità di 50.000 cellule/pozzetto in 100 µl di DMEM/FBS in una piastra a 96 pozzetti e incubati a 37 °C per 5 ore, quindi è stato rimosso il siero per 1 ora. Diverse concentrazioni di insulina sono state aggiunte nei pozzetti e incubate per 30 minuti a 37 °C, in un incubatore al 5% di CO2. Alla fine del tempo di incubazione, sono stati aggiunti nei pozzetti 100 µl di miscela di acidi grassi e sono state iniziate immediatamente letture cinetiche con un lettore FlexStation® 3. I tracciati da A a F corrispondono agli adipociti trattati, rispettivamente, con insulina 160, 16, 8, 1,6, 0,16 e 0 nM; i tracciati G e H corrispondono ai fibroblasti trattati, rispettivamente, con insulina 0 e 160 nM.

    Confronto tra fibroblasti e adipociti; curva dose-risposta per l’insulina

  • Effetto inibitorio della leptina

    Effetto inibitorio della leptina

    Adipociti 3T3L1 sono stati seminati a una densità di 50.000 cellule/pozzetto/100 µl di DMEM/FBS in una piastra a 96 pozzetti per 5 ore, quindi è stato rimosso il siero per 1 ora in presenza o in assenza di leptina (100 nM). È stata poi aggiunta nei pozzetti insulina 10 nM, che è stata incubata per altri 30 minuti a 37 °C in un incubatore al 5% di CO2. Alla fine del tempo di incubazione, sono stati aggiunti nei pozzetti 100 µl di acidi grassi e sono state iniziate immediatamente letture cinetiche con un lettore FlexStation® 3. Dati per gentile concessione di Cambridge Biotechnology. A: insulina, B: insulina e leptina, C: condizioni basali.

Tecnologia del kit del saggio di captazione degli acidi grassi QBT

  • Principio del saggio

    Principio del saggio di captazione degli acidi grassi QBT

    Il kit del saggio di captazione degli acidi grassi QBT include un tampone di caricamento contenente un analogo fluorescente degli acidi grassi nonché un colorante di quenching che riduce notevolmente la fluorescenza nello spazio extracellulare. Quando il tampone di caricamento viene aggiunto alle cellule, il trasporto dell’analogo fluorescente degli acidi grassi al loro interno determina un aumento del segnale fluorescente che viene monitorato in tempo reale utilizzando un lettore di fluorescenza per micropiastre con lettura dal basso. L’inibizione del trasporto degli acidi grassi da parte dei composti in esame provoca una riduzione del segnale fluorescente rispetto ai controlli.

Opzioni per ordinare il kit del saggio di captazione degli acidi grassi QBT

Kit del saggio di captazione degli acidi grassi QBT

Kit di valutazione - PN: R6132

  • 1 kit = 1 piastra x 2 flaconcini ciascuno

#R6132

$185.00 USD

1

Kit di esame - PN: R8132

  • 1 kit = 1 piastra x 10 flaconcini

#R8132

$1,230.00 USD

1

Kit di materiale sfuso - PN: R8133

  • 1 kit = 5 piastre x 10 flaconcini

 

Compatibile con le piastre a 96 e 384 pozzetti.

#R8133

$2,871.00 USD

1

Risorse del kit del saggio di captazione degli acidi grassi QBT

Prodotti e servizi compatibili del kit del saggio di captazione degli acidi grassi QBT