Fluorescenza

Fluorimetro, spettrofluorimetro e lettore di fluorescenza per piastre

Esistono numerosi termini per riferirsi agli strumenti utilizzati per misurare la fluorescenza di un campione: fluorometro, spettrofluorimetro, spettrofotometro a fluorescenza spettrometro a fluorescenza, fluorimetro, ecc. 

In generale, questi strumenti utilizzano una sorgente luminosa per eccitare il campione a una determinata lunghezza d’onda e misurano la fluorescenza emessa a una seconda lunghezza d’onda. Il campione può essere contenuto in numerosi formati, tra cui cuvette, capillari e piastre di Petri. Il termine “lettore di fluorescenza per micropiastre” indica uno strumento in grado di misurare la fluorescenza di campioni in una micropiastra, nella maggior parte dei casi una piastra a 96 o 384 pozzetti. Le micropiastre offrono un rendimento più elevato e sono utili per lo screening o per altre applicazioni in cui devono essere analizzati numerosi campioni.

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Cos’è un sistema spettrofluorimetrico a doppio monocromatore?

Alcuni lettori di fluorescenza per micropiastre utilizzano un doppio monocromatore invece di filtri per selezionare la lunghezza d’onda della luce che eccita il campione e quella emessa dal campione. I monocromatori utilizzano un reticolo di diffrazione per separare spazialmente i colori della luce e permettono di selezionare un’ampia varietà di lunghezze d’onda senza la necessità di installare un filtro distinto per ogni lunghezza d’onda necessaria per un’applicazione.

Il nostro spettrofluorimetro a doppio monocromatore SpectraMax Gemini utilizza due monocromatori di scansione per la selezione delle lunghezze d’onda di eccitazione e di emissione ottimali.

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Saggi per il calcio (GPCR)

La segnalazione cellulare mediata dai recettori accoppiati a proteina G (G-Protein Coupled Receptors, GPCR) può essere valutata monitorando gli effettori a valle come il calcio o l’AMP ciclico (cAMP). Il flusso di calcio che si verifica in risposta all’attivazione dei recettori accoppiati a proteina G_q viene comunemente monitorato in tempo reale nelle cellule vive utilizzando coloranti sensibili al calcio su un lettore di fluorescenza per piastre.

Ecco alcune note applicative sui saggi per il calcio (GPCR) che possono essere di vostro interesse:

• Monitoraggio dell’attivazione dei recettori accoppiati a proteina G_q sul lettore SpectraMax i3x con modulo di iniezione*
• Ottimizzazione di un saggio sul recettore muscarinico M3 utilizzando cellule CHO congelate sul lettore FlexStation 3
• Segnalazione del calcio con i kit dei saggi FLIPR Calcium 6 e 6-QF sul lettore FlexStation 3

Saggi per il cAMP (GPCR)

Il monitoraggio dei livelli di cAMP, un secondo messaggero prodotto in risposta all'attivazione della adenilato ciclasi, rappresenta una delle modalità più comuni per screenare a favore di agonisti e antagonisti dei recettori accoppiati a proteina Gi/Gs. I livelli di cAMP possono essere monitorati usando molecole fluorescenti che si legano al cAMP e vengono rilevate usando un lettore per piastre in fluorescenza.

Ecco alcune note applicative sui saggi per il cAMP (GPCR) che possono essere di vostro interesse:

• Soluzione completa per il flusso di lavoro per il cAMP usando il kit di saggio fluorescente per il cAMP CatchPoint
• Saggio HTRF cAMP HiRange sui lettori per micropiastre SpectraMax Multi-Mode

Saggi per l'apoptosi con caspasi-3

L'apoptosi è un programma cellulare altamente regolato che determina morte cellulare in processi normali come per esempio lo sviluppo embrionale, come anche malattie tra cui il cancro e le condizioni neurodegenerative. I saggi per l'apoptosi possono essere eseguiti utilizzando una serie di sistemi di rilevazione tramite imaging o lettori per micropiastre e forniscono informazioni preziose sui meccanismi di morte cellulare normali e correlati a malattia.

Scoprite un saggio omogeneo, in un unico passaggio, per la caspasi-3 disegnato specificamente per i lettori per micropiastre:

• Kit di saggio EarlyTox Caspase-3/7 R110 su lettori per micropiastre in fluorescenza SpectraMax

Saggi di proliferazione cellulare

La quantificazione della proliferazione cellulare usando la fluorescenza permette di monitorare agevolmente gli effetti dei farmaci e di altri trattamenti sperimentali sulla crescita cellulare.

Questa nota applicativa illustra due metodiche di saggio di una proliferazione cellulare. Nella prima, la proliferazione cellulare viene quantificata usando una curva standard basata su cellule. Nella seconda, la proliferazione cellulare viene quantificata usando campioni cellulari trattati con RNasi e una curva standard di DNA.

• Misurazione della proliferazione cellulare usando il saggio di proliferazione cellulare CyQUANT Cell con i lettori per micropiastre SpectraMax

Saggi di citotossicità

Lo sviluppo di saggi in vitro predittivi adatti per la valutazione di sicurezza e di efficacia è di elevato interesse per migliorare il processo di sviluppo farmacologico e ridurre il tasso di abbandono dei farmaci. Vi è grande interesse nell'utilizzo delle cellule staminali come strumenti per lo screening dei composti durante le prime fasi dello sviluppo dei farmaci.

In questo poster scientifico presentiamo i risultati ottenuti da uno dei nostri lettori per piastre multimodali per eseguire una valutazione di tossicità di vari composti usando modelli cellulari derivati dalle cellule staminali secondo una modalità ad alto rendimento:

• Saggi ad alto rendimento basati su cellule per la valutazione della tossicità usando il lettore per piastre SpectraMax^® Paradigm

Saggio di cardiotossicità EarlyTox

I cardiomiociti umani derivati da cellule staminali presentano caratteristiche fenotipiche e profili elettrofisiologici simili a quelli delle cellule cardiache umane native. I cardiomiociti in coltura sono in grado di formare un sincizio battente che si comporta in maniera simile ai cardiomiociti nativi. L’oscillazione dei livelli di calcio intracellulare che si verifica con le contrazioni sincronizzate delle cellule può essere monitorata utilizzando un colorante sensibile al calcio e le modifiche nel pattern di oscillazione indotte dai trattamenti possono essere esaminate osservando le variazioni del segnale fluorescente nel tempo.

Di seguito trovate una nota applicativa che potrebbe essere di vostro interesse:

• Saggi multiparametrici per cardiomiociti su una singola piattaforma

Kit di saggio della vitalità cellulare EarlyTox

I saggi di vitalità cellulare sono fondamentali per un ampio spettro di aree di ricerca che spaziano dall'indagine dei meccanismi di morte cellulare allo sviluppo di nuovi composti terapeutici mirati all'apoptosi nelle malattie. Una delle tecnologie di rilevazione più diffuse per la vitalità cellulare è un lettore per micropiastre a fluorescenza.

Ecco alcune applicazioni che possono essere di vostro interesse:

• Misurazione della morte cellulare sul lettore SpectraMax iD3 con saggi di vitalità cellulare
• Kit di saggio EarlyTox Live/Dead su lettori per micropiastre in fluorescenza SpectraMax
• Kit di saggio EarlyTox Caspase-3/7 R110 su lettori per micropiastre in fluorescenza SpectraMax
• Kit di saggio del glutatione EarlyTox su lettori per micropiastre in fluorescenza SpectraMax

Quantificazione di proteine fluorescenti

Le proteine dentro le cellule eucariotiche esistono in uno stato dinamico, in un equilibrio altamente regolato tra sintesi e degradazione. Benché la sintesi proteica sia ben compresa dopo decenni di studio, i principali progressi nella conoscenza della degradazione delle proteine si sono verificati solo nel corso degli ultimi due decenni.

Scoprite la proteina fluorescente nella nostra nota applicativa:

• Misurazione dell'inibizione del proteosoma in cellule vive sui lettori per micropiastre Analyst® GT, FLEXstation® e Gemini EM usando il sensore per proteosoma di BD Biosciences
• Utilizzo del kit per le proteine NanoOrange con i lettori per micropiastre SpectraMax

Analisi di nanoparticelle

La nanotecnologia è un campo in rapido sviluppo che ha attirato l’interesse della comunità scientifica a causa delle sue potenziali applicazioni nella ricerca biomedica.

Attualmente esiste un numero limitato di tecniche disponibili per caratterizzare le nanoparticelle e le loro interazioni molecolari. Qui descriviamo l’analisi della firma spettrale come metodo per confermare le interazioni tra nanoparticelle e molecole di rivestimento di superficie.

• Analisi della firma spettrale di nanoparticelle con funzionalizzazione di superficie

Flusso del calcio neuronale

Il monitoraggio delle variazioni del calcio intracellulare è una tecnica estremamente utile per studiare gli svariati ruoli svolti dagli ioni calcio nei neuroni funzionali. La misurazione diretta del flusso dinamico del calcio nelle reti neuronali rivela in che modo i neuroni elaborano i segnali provenienti dallo spazio extracellulare.

Questa nota applicativa dimostra la fattibilità della misurazione del flusso di calcio intracellulare in neuroni corticali primari di ratto in una micropiastra in fluorescenza:

• Saggio per il flusso di calcio per studi di neurotossicità in vitro e screening farmacologico

Quantificazione degli acidi nucleici

La quantificazione del DNA è un passaggio fondamentale in biologia molecolare, richiedendo accuratezza, affidabilità e impiego di volumi di campione sempre più ridotti per applicazioni come per esempio il sequenziamento di prossima generazione. Rispetto alla quantificazione del DNA per via spettrofotometrica, la metodica fluorometrica offre vantaggi critici come per esempio una sensibilità significativamente incrementata, elevata selettività per il DNA a doppio filamento (dsDNA) in confronto al DNA a singolo filamento (ssDNA) o all'RNA, e un miglioramento della tolleranza ai contaminanti (molecole proteiche e di carboidrati).

Ecco alcune note applicative sulla quantificazione degli acidi nucleici che potete trovare interessanti:

• Quantificazione di campioni di dsDNA usando i kit di saggio del dsDNA SpectraMax Quant
• Quantificazione fluorescente sensibile del DNA con il kit di saggio del dsDNA Quant-iT PicoGreen

Rilevazione del triptofano

La fluorescenza intrinseca delle proteine si deve agli amminoacidi aromatici triptofano, tirosina e fenilalanina. Il triptofano domina l'emissione delle proteine ed è il più sensibile alla polarità del solvente e all'ambiente locale. L'analisi delle variazioni di fluorescenza del triptofano può restituire informazioni sulla denaturazione e conformazione delle proteine.

In queste note applicative dimostriamo il rendimento dei lettori per piastre multimodali SpectraMax® per saggi in cui viene misurata la fluorescenza intrinseca del triptofano.

• Misurate la fluorescenza intrinseca del triptofano sul lettore per micropiastre SpectraMax iD3
• Rilevazione intrinseca del triptofano con la piattaforma per micropiastre multimodale SpectraMax i3