Scoperta e ottimizzazione di antigeni/immunogeni
Soluzioni per la scoperta di immunogeni e lo sviluppo di vaccini
I flussi di lavoro inerenti allo sviluppo dei vaccini variano notevolmente a seconda della piattaforma (per es. virus inattivato o vaccino a DNA) prescelta, ognuna delle quali ha i suoi vantaggi. La CEPI (Coalition for Epidemic Preparedness Innovations) e numerose altre organizzazioni promuovono questi approcci diversificati durante una pandemia al fine di aumentare le probabilità di successo contro un agente infettivo.
In questo video, Justin Dranschack, responsabile delle piattaforme per il settore biofarmaceutico, illustra la nostra soluzione per il flusso di lavoro per lo sviluppo di vaccini mediante l’uso di proteine ricombinanti come immunogeni e indica i sistemi che vi possono aiutare nelle vostre attività di ricerca.
Flusso di lavoro per la scoperta di antigeni/immunogeni
Passaggio 1: Screening per il legame ad anticorpi virus-specifici
Il phage display è un potente metodica in vitro che può essere utilizzata per lo screening di milioni di anticorpi diretti contro antigeni virali, che vengono poi presi in considerazione come potenziali candidati per lo sviluppo di vaccini.
Passaggio 2: Caratterizzazione degli immunogeni
Gli studi di immunogenicità vengono condotti per determinare se gli antigeni identificati nella fase precedente possono innescare una risposta immunitaria, perché la metodica del phage display permette di verificare soltanto il legame antigene-anticorpo. In caso di induzione di una risposta immunitaria (spesso misurata mediante un saggio ELISA), l’antigene, che a questo punto viene considerato un immunogeno, avanzerà nel processo di sviluppo. L’immunogeno viene ulteriormente caratterizzato per poter essere ingegnerizzato con le proprietà desiderate nella fase successiva.
Passaggio 3: Ingegnerizzazione delle proteine (immunogeni)
È noto che alcune proprietà degli immunogeni causano effetti indesiderati quando queste molecole vengono iniettate negli animali o nell’essere umano. Pertanto, vengono utilizzati strumenti di ingegneria genetica come CRISPR/Cas9 per manipolare il DNA che codifica per l’immunogeno in modo da rimuovere queste proprietà.
Passaggio 4: Trasfezione cellulare e clonaggio
Una volta ottimizzato il DNA, è necessario aumentare la produzione dell’immunogeno per eseguire ulteriori test. In questa fase, è fondamentale generare una linea cellulare di derivazione clonale che presenti elevati livelli di espressione. Questo processo spesso comporta l’uso delle tecniche di ingegneria genetica descritte sopra e il clonaggio di singole cellule in piastre a micropozzetti, specialmente in caso di utilizzo di linee di cellule di mammifero.
Passaggio 5: Screening per attributi di qualità, compreso il titolo
In seguito al clonaggio di singole cellule, le linee cellulari vengono monitorate per verificarne la crescita e valutare l’espressione delle proteine. L’immunogeno viene quindi purificato e preparato per essere iniettato in un animale per indurre una risposta immunitaria. Gli anticorpi generati dall’animale vengono poi sottoposti a screening in un saggio di neutralizzazione virale per determinare l’efficacia dei vaccini.
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