Ricerca sui vaccini contro il coronavirus SARS-CoV-2 (COVID-19)

Conta cellulare/vitalità cellulare

Le conte cellulari e la vitalità cellulare sono valutazioni fondamentali in numerosi esperimenti biologici, comprese molte applicazioni di virologia come il titolo virale e l’infettività. La microscopia cellulare viene frequentemente utilizzata per acquisire immagini in campo chiaro e in fluorescenza delle cellule allo scopo, rispettivamente, di contarle e di determinare se sono vive o morte.

Di seguito trovate alcune note applicative sulla conta cellulare e la vitalità cellulare che possono aiutarvi nelle vostre attività di ricerca sui vaccini per la COVID-19.

• Colorazione Live/Dead (kit del saggio EarlyTox™ Live/Dead) - Misurazione della vitalità cellulare e della citotossicità con il kit per l’integrità cellulare EarlyTox
• Saggio MTT - Valutate la vitalità e proliferazione cellulare con letture colorimetriche
• Efficienza di trasfezione - Ottimizzazione della trasfezione di GFP con la piattaforma di rilevazione multimodale SpectraMax i3
• Proliferazione cellulare (crescita cellulare) - Generazione di curve di crescita e confluenza sull’imager CloneSelect
• Vitalità cellulare (saggio di vitalità cellulare in luminescenza CellTiter-Glo®) - Saggi di vitalità cellulare e citotossicità in luminescenza sul lettore per micropiastre multimodale SpectraMax i3x

Sviluppo di linee cellulari

Lo sviluppo di linee cellulari richiede la scoperta di cloni derivati da singole cellule che producano livelli elevati e costanti della proteina terapeutica target con gli attributi di qualità desiderati e la scalabilità necessaria per ottenere una produzione commerciale conforme alle GMP.

Di seguito trovate alcune note applicative sullo sviluppo di linee cellulari che possono aiutarvi nelle vostre attività di ricerca sui vaccini per la COVID-19.

• Prelievo di colonie - Miglioramento dello sviluppo di ibridomi virus-specifici mediante l’uso delle tecnologie del sistema ClonePix e dell’imager CloneSelect
• Verifica della monoclonalità - Garanzia di clonalità affidabile mediante l’uso di calceina AM con effetti minimi sulla vitalità
• Separazione cellulare - Un flusso di lavoro che combina l’isolamento di singole cellule e l’imaging delle micropiastre migliora l’efficienza di clonaggio offrendo maggiori garanzie di clonalità
• Linee cellulari knock-in/out - Validazione di cellule sottoposte a editing con il sistema CRISPR utilizzando tecniche di imaging e rilevazione di western blot su un lettore per micropiastre

Soluzioni per la ricerca sulla COVID-19

Molecular Devices è impegnata a sostenere gli scienziati che studiano la risposta cellulare alla COVID-19 e lo sviluppo di vaccini offrendo tecnologie e soluzioni rapidamente implementabili. Disponiamo di soluzioni per il laboratorio validate e conformi alle normative che includono lettori per micropiastre, lavatrici, sviluppo biofarmaceutico e sistemi di imaging cellulare per soddisfare tutte le vostre esigenze di ricerca.

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Saggi della luciferasi

Le luciferasi sono enzimi che utilizzano un substrato chiamato luciferina, oltre all’ossigeno e all’ATP, in un processo energetico che produce luce, come il bagliore giallo delle lucciole. Le potenzialità della luciferasi sono state sfruttate dagli scienziati per sviluppare reazioni la cui emissione di luce viene utilizzata per monitorare processi biologici, come l’espressione genica, i legami tra biomolecole e la vitalità cellulare.

Di seguito trovate alcune note applicative sui saggi della luciferasi che possono aiutarvi nelle vostre attività di ricerca sui vaccini per la COVID-19:

• Misurazione dell’espressione della luciferasi utilizzando il kit del saggio reporter SpectraMax Glo Steady-Luc
• Saggio reporter a doppia luciferasi (DLR)
• Monitoraggio dell’attivazione di NF-κB con un sensibile saggio con doppio sistema reporter
• Rilevazione dell’espressione della doppia luciferasi
• Rilevazione altamente sensibile della doppia luciferasi con il kit del saggio reporter SpectraMax DuoLuc

Affinità di legame di proteine e antigeni

L’affinità di legame è una misura della forza con cui due molecole (spesso una coppia antigene/anticorpo) interagiscono tra loro. A causa della notevole eterogeneità esistente tra proteine diverse in termini di dimensioni, localizzazione, solubilità e molte altre caratteristiche, sono stati sviluppati numerosi tipi di saggi per valutare l’affinità di legame.

Scoprite di più sulle applicazioni di uso comune per l’affinità di legame di proteine/antigeni che possono aiutarvi nelle vostre attività di ricerca sui vaccini per la COVID-19:

• ELISA (IgG/IgM) - Saggio di immunoassorbimento enzimatico (ELISA)
• Legame basato su cellule - Aumento della sensibilità nei saggi senza lavaggio utilizzando l’imaging confocale
• HTRF- Servizi di profilazione mediante HTRF sul lettore per micropiastre multimodale SpectraMax iD5
• AlphaScreen/AlphaLISA - Screening AlphaLISA sulla piattaforma di rilevazione multimodale per micropiastre SpectraMax Paradigm

Quantificazione di proteine e acidi nucleici (aspecifica)

I protocolli sperimentali prevedono un’elevata quantità di procedure di preparazione di saggi/campioni; tuttavia, comportano anche un allungamento dei tempi per garantire la qualità. È possibile bilanciare le esigenze di velocità e di assicurazione di qualità mediante metodi di quantificazione aspecifici. Le quantità totali di proteine e/o acidi nucleici possono essere misurate utilizzando l’assorbanza nell’UV su un lettore per micropiastre.

Di seguito trovate alcune note applicative sulla quantificazione (aspecifica) di proteine e acidi nucleici che possono aiutarvi nelle vostre attività di ricerca sui vaccini per la COVID-19:

• Saggi proteici colorimetrici (saggi BCA/ Bradford) - Misurate le proteine totali nei lisati cellulari con il lettore per micropiastre SpectraMax ABS Plus
• Quantificazione delle proteine (utilizzando l’assorbanza nell’UV) - Quantificazione diretta delle proteine usando la micropiastra per microvolumi SpectraDrop
• Quantificazione del DNA/RNA (utilizzando l’assorbanza nell’UV) - Misurazioni di assorbanza sul DNA e l'RNA usando i lettori per micropiastre SpectraMax
• Quantificazione del DNA basata sulla fluorescenza - Quantificazione di campioni di dsDNA usando i kit di saggio del dsDNA SpectraMax Quant

Quantificazione di proteine e acidi nucleici (specifica)

Molti esperimenti biologici sono finalizzati ad alterare l’espressione delle proteine in una cellula mediante ingegneria genetica o trattamenti farmacologici. Per capire l’effetto di questa manipolazione è fondamentale misurare le risposte di proteine specifiche. Gli anticorpi vengono frequentemente utilizzati nei saggi biologici (immunodosaggi) a tale scopo a causa della loro capacità intrinseca di legarsi specificamente a una proteine di interesse.

Scoprite di più sulle applicazioni di uso comune per la quantificazione (specifica) di proteine e acidi nucleici che possono aiutarvi nelle vostre attività di ricerca sui vaccini per la COVID-19:

• ELISA (secrezione di citochine) - Saggio di immunoassorbimento enzimatico (ELISA)
• Western blot - Western blot
• HTRF (secrezione di citochine) - Normalizzazione dei saggi HTRF sulle citochine in funzione della vitalità cellulare
• AlphaScreen/AlphaLISA - Screening AlphaLISA sulla piattaforma di rilevazione multimodale per micropiastre SpectraMax Paradigm
• ValitaTITER (quantificazione delle IgG utilizzando la polarizzazione della fluorescenza) - Semplificazione del flusso di lavoro per la misurazione delle IgG nello sviluppo di linee cellulari

Flussi di lavoro per lo sviluppo di vaccini

I flussi di lavoro inerenti allo sviluppo dei vaccini variano a seconda della piattaforma (per es. virus inattivato o vaccino a DNA) prescelta, ognuna delle quali ha i suoi vantaggi. Qui è illustrata una varietà di flussi di lavoro correlati ai virus, dalla scoperta di anticorpi e antigeni allo sviluppo di linee cellulari.

Scoprite di più sulle applicazioni di uso comune per i flussi di lavoro per lo sviluppo di vaccini che possono aiutarvi nelle vostre attività di ricerca sui vaccini per la COVID-19:

• Flusso di lavoro per la scoperta di antigeni/immunogeni
• Scoperta di anticorpi - flusso di lavoro per il phage display
• Scoperta di anticorpi - flusso di lavoro per lo screening di ibridomi
• Flusso di lavoro per lo sviluppo di linee cellulari stabili

Neutralizzazione virale

L’efficacia dei vaccini e dei farmaci antivirali viene valutata in base alla loro capacità di inibire l’ingresso dei virus (infezione) nelle cellule cresciute in coltura.

• Saggio di neutralizzazione con riduzione delle placche (PRNT)
• Saggio di neutralizzazione con riduzione virale (VRNT) - Virus Reduction Neutralization Test: A Single-Cell Imaging High-Throughput Virus Neutralization Assay for Dengue
• Microneutralizzazione    Development of a High-Throughput Respiratory Syncytial Virus Fluorescent Focus-Based Microneutralization Assay

Patogenesi virale (vie di segnalazione virali)

La comprensione dei meccanismi di base attraverso i quali i virus entrano nelle cellule, si replicano, vengono rilasciati ecc. è cruciale per lo sviluppo di trattamenti efficaci per le malattie infettive. La microscopia a fluorescenza è uno strumento fondamentale in qualsiasi laboratorio di virologia perché consente la visualizzazione ad alta risoluzione delle vie di segnalazione virali nel tempo. Per studiare le vie cellulari colpite dai virus possono essere utilizzati saggi di segnalazione cellulare e saggi con geni reporter, che vengono eseguiti mediante lettori per micropiastre.

Di seguito trovate alcune note applicative sulla patogenesi virale (vie di segnalazione virali) che possono aiutarvi nelle vostre attività di ricerca sui vaccini per la COVID-19:

• Internalizzazione - Visualizzazione delle vescicole subcellulari per quantificare l’autofagia nelle cellule neuronali
• Saggi con geni reporter - Misurazione dell’espressione della luciferasi utilizzando il kit del saggio reporter SpectraMax Glo Steady-Luc
• Segnalazione cellulare (GPCR) - Soluzione completa per il flusso di lavoro per il cAMP usando il kit di saggio fluorescente per il cAMP CatchPoint

Titolo virale

I virus infettano le cellule per replicarsi, un processo che non sono in grado di compiere da soli. La misurazione della quantità di virus in un campione privo di cellule non fornisce informazioni sull’infettività, per cui ha un’utilità limitata. Invece, l’imaging cellulare permette di valutare la capacità di un determinato virus di infettare cellule in coltura. Le concentrazioni virali vengono determinate in base alla percentuale di cellule infettate.

• Saggio delle placche - L’Università di Zurigo utilizza il sistema in campo largo ImageXpress per studiare le interazioni tra ospite e patogeni
• Saggio di formazione di foci
• Diluizione al punto finale