Kit del saggio della vitalità cellulare EarlyTox
I kit dei saggi di vitalità cellulare EarlyTox™ sono costituiti da una famiglia di reagenti basati sulla fluorescenza per la valutazione della vitalità cellulare, della proliferazione cellulare e di vari eventi di apoptosi utilizzando cellule di mammifero. Ottimizzati per l’uso con lettori per micropiastre, i kit di questi saggi utilizzano un protocollo di saggio omogeneo senza lavaggio, che permette la caratterizzazione di un profilo concentrazione-risposta completo dei composti in esame.
Kit del saggio della vitalità cellulare EarlyTox
I saggi di vitalità cellulare sono fondamentali per un ampio spettro di aree di ricerca che spaziano dall'indagine dei meccanismi di morte cellulare allo sviluppo di nuovi composti terapeutici mirati all'apoptosi nelle malattie. Una delle tecnologie di rilevazione più diffuse per la vitalità cellulare è un lettore per micropiastre a fluorescenza. I kit dei saggi di vitalità cellulare EarlyTox sono stati ottimizzati per offrire un’elevata sensibilità e accuratezza di rilevazione delle micropiastre, fornendo una soluzione completa per il monitoraggio della vitalità cellulare.
- Qualità ottimale dei dati per saggi con lettori per micropiastre
- Protocollo sperimentale semplificato e omogeneo
- Protocolli preconfigurati nel software SoftMax Pro
Kit del saggio EarlyTox™ Live/Dead
Questo kit permette la rilevazione delle popolazioni di cellule di mammifero sia vive che morte in base all’integrità della membrana cellulare tramite l’uso di un lettore di fluorescenza per micropiastre. La calceina AM è un marcatore delle cellule vive ampiamente utilizzato. La calceina AM non fluorescente penetra nella membrana cellulare intatta e viene convertita in calceina fluorescente dalle esterasi intracellulari. Il numero di cellule vive è pertanto indicato dall’intensità della fluorescenza verde nel citosol, con eccitazione a 495 nm ed emissione a 530 nm. L’EthD-III è sostanzialmente non fluorescente e non riesce a penetrare in una membrana plasmatica intatta. In caso di compromissione dell’integrità della membrana cellulare associata a morte cellulare, l’EthD-III entra nelle cellule e si lega agli acidi nucleici, provocando un’intensa fluorescenza rossa nelle cellule morte, con eccitazione a 530 nm ed emissione a 645 nm.
Kit del saggio EarlyTox™ Live Cell
Questo kit permette di rilevare la popolazione di cellule di mammifero vive utilizzando un lettore di fluorescenza per micropiastre in base all’integrità della membrana cellulare e all’attività dell’esterasi intracellulare. La calceina AM è un marcatore delle cellule vive ampiamente utilizzato. La calceina AM non fluorescente penetra nella membrana cellulare intatta e viene convertita in calceina, la forma fluorescente, dalle esterasi intracellulari. Il numero di cellule vive è pertanto indicato dall’intensità della fluorescenza verde nel citosol, con eccitazione a 495 nm ed emissione a 530 nm. Data la sua ridotta tossicità cellulare, la calceina AM consente inoltre di monitorare le cellule a lungo termine e di eseguire saggi di proliferazione cellulare.
Kit del saggio EarlyTox™ Caspase-3/7 R110
Questo kit permette di analizzare l’apoptosi in base all’attività della caspasi-3/7 e alla sua sequenza bersaglio consenso, Asp-Glu-Val-Asp (DEVD). La caspasi-3 e la caspasi-7 sono proteasi che vengono attivate durante la fase di esecuzione dell’apoptosi. Questo kit permette di eseguire un saggio omogeneo, in un unico passaggio, concepito specificamente per i lettori per micropiastre. Il substrato fluorogeno (Ac-DEVD)2-R110 contiene due sequenze bersaglio consenso DEVD e viene completamente idrolizzato dagli enzimi nel lisato cellulare. L’idrolisi di entrambi i peptidi DEVD determina il rilascio del colorante fluorescente verde R110, provocando un considerevole aumento della fluorescenza, con eccitazione a 490 nm ed emissione a 520 nm. Il kit del saggio include l’inibitore competitivo della caspasi-3/7 Ac-DEVD-CHO, da utilizzare come controllo negativo. Nel kit è fornito anche il colorante R110 per generare una curva standard, che può essere utilizzata per quantificare l’attività della caspasi-3.
Kit del saggio EarlyTox™ Caspase-3/7 NucView 488 e kit del saggio EarlyTox™ Caspase-3/7-D NucView 488
Questo kit consente la rilevazione dell’apoptosi in popolazioni cellulari intatte in base alla misurazione dell’attività della caspasi-3/7 utilizzando un lettore di fluorescenza per micropiastre o un sistema di imaging a fluorescenza. La caspasi-3 e la caspasi-7 sono proteasi che vengono attivate durante la fase di esecuzione dell’apoptosi. Il substrato della caspasi-3 NucView 488 (formulato, rispettivamente, in DMSO o soluzione salina tamponata con fosfato (Phosphate-Buffered Saline, PBS) per il kit del saggio EarlyTox Caspase-3/7-D NucView 488 e per il kit del saggio EarlyTox Caspase-3/7 NucView 488) viene utilizzato per rilevare l’attività della caspasi-3/7 nelle cellule intatte senza interferire con essa. Il substrato è costituito da un colorante fluorogenico per il DNA accoppiato alla sequenza di riconoscimento DEVD della caspasi-3/7. Inizialmente non fluorescente, il substrato attraversa la membrana plasmatica ed entra nel citoplasma. Nelle cellule apoptotiche, la caspasi-3/7 scinde il substrato, provocando il rilascio del colorante ad alta affinità per il DNA, che migra nel nucleo della cellula e colora il DNA con un’intensa fluorescenza verde, con eccitazione a 500 nm ed emissione a 530 nm. La colorazione con NucView 488 può essere fissata con formaldeide ed è compatibile con la successiva immunocolorazione. Il kit del saggio include un reagente di mascheramento opzionale per ridurre la fluorescenza di fondo, quando necessario. La formulazione in PBS è raccomandata per le cellule sensibili al DMSO.
Kit del saggio EarlyTox™ Glutathione
Questo kit consente la rilevazione di un evento di apoptosi in fase precoce in base alla misurazione del contenuto di glutatione nelle cellule di mammifero vive utilizzando un lettore di fluorescenza per micropiastre. Nelle fasi precoci dell’apoptosi mediata dai mitocondri si verifica una riduzione dei livelli cellulari di glutatione (GSH), che è un importante antiossidante presente nelle cellule di mammifero, a causa dell’efflusso di GSH. Questo kit utilizza il monoclorobimano (MCB), un colorante cellulare permeante che ha un’elevata affinità per il GSH, per rilevare i livelli cellulari di GSH in un evento apoptotico. In assenza di reazioni, il colorante è quasi non fluorescente. Dopo la reazione del colorante con GSH, catalizzata dagli enzimi glutatione-S-transferasi (GST) endogeni, il colorante presenta una fluorescenza blu, con eccitazione a 394 nm ed emissione a 490 nm. L’intensità del segnale fluorescente generato dal saggio riflette la quantità di GSH presente nelle cellule.