Lettori per micropiastre per ELISA ad assorbanza SpectraMax ABS e ABS Plus

Assorbanza

Imparate ogni aspetto della rilevazione dell'assorbanza, come funziona, in che modo si misura e come si può usare per calcolare la concentrazione. Forniamo inoltre informazioni sulle comuni applicazioni e saggi in assorbanza, inclusi gli ELISA, la quantificazione delle proteine e degli acidi nucleici, e la crescita microbica.

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Salute cellulare

La vitalità cellulare si riferisce al numero di cellule sane in una popolazione e può essere valutata usando saggi che misurano l’attività enzimatica, l’integrità della membrana cellulare, la produzione di ATP e altri indicatori. Queste metodiche possono utilizzare letture in luminescenza, in fluorescenza o colorimetriche come indicatori della vitalità cellulare generale o anche di specifiche vie cellulari. I saggi di citotossicità e vitalità cellulare vengono spesso utilizzati per valutare l’effetto di un farmaco o di un altro trattamento e rappresentano validi strumenti nella ricerca di nuovi composti terapeutici; inoltre, permettono di approfondire la comprensione del funzionamento delle cellule normali.

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Saggi di vitalità cellulare, di proliferazione cellulare, di citotossicità (MTT, XTT, MTS)

I saggi colorimetrici che impiegano sali di tetrazolio come MTT, XTT e MTS possono essere usati per misurare la proliferazione cellulare e la citotossicità. Per esempio, il saggio MTT dipende dalla riduzione di MTT da parte di enzimi presenti nelle cellule vitali per formare un prodotto di blu formazano che può essere quantificato misurando l'assorbanza. La scelta del saggio può basarsi sul flusso di lavoro desiderato e sul tempo richiesto.

Per avere informazioni su alcune di queste metodiche leggere la nota applicativa:

• Valutate la vitalità e proliferazione cellulare con letture colorimetriche

Quantificazione di DNA/RNA

L'assorbanza di un campione di DNA misurata a 260 nm su uno spettrofotometro o un lettore per micropiastre può essere usata per calcolarne la concentrazione. La quantificazione del DNA mediante la lettura dell’assorbanza può essere eseguita su campioni con concentrazione compresa tra circa 0,25 µg/ml e circa 125 µg/ml in micropiastre.

Imparate con le nostre note applicative aggiornate come si misura l'assorbanza sui lettori per micropiastre ad assorbanza che vi proponiamo:

• Misurazioni di assorbanza sul DNA e l'RNA usando i lettori per micropiastre SpectraMax
• Rilevazione di DNA e proteine ad alto rendimento, a basso volume, sul lettore per micropiastre SpectraMax ABS Plus

ELISA

I saggi di immunoassorbimento enzimatico (ELISA) si usano per misurare la quantità di una specifica proteina, tramite un formato a micropiastre, e nei casi più frequenti i risultati vengono rilevati con l'assorbanza nell'intervallo di lunghezze d'onda del visibile. I formati ELISA chemioluminescenti e fluorescenti offrono un aumento della sensibilità per una quantificazione accurata degli analiti meno abbondanti.

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Saggi per le endotossine

Il monitoraggio dei campioni per la presenza di contaminanti rappresenta una fase critica nel processo di produzione nel settore farmaceutico e in quello dei dispositivi medici. Un contaminante frequente, l'endotossina, può determinare febbre, infiammazione, cefalea, nausea e persino il decesso. Per fortuna le endotossine possono essere prontamente monitorate utilizzando saggi turbidimetrici, colorimetrici o fluorometrici.

Queste note applicative descrivono i vari tipi di saggi per le endotossine:

• Monitoraggio delle endotossine con il lettore per micropiastre SpectraMax ABS Plus
• Valutazione delle endotossine basata su piastra in ambienti GLP/GMP impiegando un saggio colorimetrico
• Rilevazione di endotossine con il saggio per il fattore C ricombinante PyroGene

Cinetica enzimatica, crescita microbica/batterica

Numerosi esperimenti biologici richiedono il monitoraggio della crescita batterica o la misurazione delle modifiche enzimatiche per periodi prolungati (ore, giorni o anche settimane).

Ecco alcune note applicative aggiornate che illustrano come impostare dei saggi cinetici per misurare la crescita batterica usando i nostri strumenti e il nostro software:

• Analisi cinetica avanzata di un saggio di crescita batterica
• Misurazioni cinetiche multitasking degli effetti di IPTG sull'espressione proteica e la crescita batterica
• Misurazione della crescita cellulare a lungo termine usando una lettura cinetica discontinua

Applicazioni per microvolumi

La quantificazione di molti tipi di campioni si ottiene attraverso misurazioni di assorbanza in una cuvetta o in una micropiastra. Tuttavia, quando il materiale sia scarso o i campioni siano preziosi, è richiesta la quantificazione di volumi molto ridotti di campione. Sono disponibili strumenti e accessori che permettono la quantificazione di volumi piccoli fino a 2 µl o persino 0,5 µl.

Informatevi sui nostri strumenti e tecniche per i microvolumi:

• Quantificazione diretta delle proteine usando la micropiastra per microvolumi SpectraDrop
• Massimizzazione del rendimento della micropiastra per microvolumi SpectraDrop per la quantificazione del DNA
• Quantificazione e analisi degli acidi nucleici impiegando lo spettrofotometro QuickDrop

Microbiologia e contaminanti

Si stima che i microbi, compresi i batteri, rappresentino circa il 15 percento della biomassa esistente sulla terra e i microbi presenti nel corpo umano sono 10 volte più numerosi delle cellule umane. Questi microrganismi ci offrono notevoli benefici e sono anche vitali per numerosi campi di ricerca, dalla medicina alla produzione di energia alternativa. In compenso, per garantire la sicurezza dei prodotti farmaceutici, i microbi e le sostanze tossiche che essi producono devono essere monitorati. Gli scienziati le cui ricerche sono basate sull’uso di cellule di mammifero devono monitorare attentamente queste colture per rilevare eventuali contaminanti microbici indesiderati allo scopo di garantire l’affidabilità dei risultati sperimentali ottenuti.

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Quantificazione e analisi degli acidi nucleici (DNA/RNA)

Gli acidi nucleici sono grandi molecole biologiche comuni a tutte le forme di vita note. L'acido desossiribonucleico (DNA) è costituito da un doppio filamento di coppie di nucleotidi, mentre generalmente l’acido ribonucleico (RNA) è formato da un singolo filamento. I nucleotidi che compongono il DNA sono l’adenina, la citosina, la guanina e la timina, mentre l’RNA contiene uracile al posto della timina. Il DNA costituisce il materiale genetico di tutti gli organismi e codifica le informazioni di cui le cellule hanno bisogno per sintetizzare le proteine.

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Misurazioni della densità ottica impiegando la tecnologia PathCheck

Gli spettrofotometri e i lettori per micropiastre nell'UV/VIS differiscono fondamentalmente per la geometria del fascio. Negli spettrofotometri i campioni vengono letti attraverso cuvette o provette con un cammino della luce di 1 cm, orizzontale, semplificando i saggi basati sui coefficienti di estinzione. Nel lettore per micropiastre il fascio di luce verticale comporta una lunghezza del cammino che dipende dal volume di liquido in ciascun pozzetto. A tale problema si è rimediato con la tecnologia PathCheck di Molecular Devices, che corregge automaticamente le misurazioni della densità ottica (OD) a una lunghezza del cammino di 1 cm.

Queste note applicative discutono i principi e gli utilizzi della tecnologia PathCheck:

• Misurazioni della densità ottica corrette automaticamente a una lunghezza del cammino di 1 cm con la tecnologia PathCheck
• Misurazione dei composti fenolici nel vino rosso usando il lettore per micropiastre 384 SpectraMax Plus
• Misurazioni di assorbanza sul DNA e l'RNA usando i lettori per micropiastre SpectraMax

Rilevazione, quantificazione e analisi delle proteine

La rilevazione, la quantificazione e l’analisi delle proteine sono fondamentali per l'indagine di una vasta gamma di processi biologici. La misurazione della concentrazione delle proteine è necessaria in processi che vanno dalla purificazione e marcatura delle proteine alla preparazione dei campioni per l’elettroforesi. Le proteine possono essere quantificate direttamente mediante la misurazione dell’assorbanza a 280 nm oppure indirettamente utilizzando metodi colorimetrici (BCA, Bradford, ecc.) o fluorimetrici che offrono vantaggi come una maggiore sensibilità. Per identificare e misurare una specifica proteina in un campione complesso, ad esempio siero o un lisato cellulare, è possibile utilizzare un saggio ELISA.

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Quantificazione delle proteine (saggi BCA, di Bradford, di Lowry)

La concentrazione proteica può essere misurata per via diretta, attraverso l'assorbanza a 280 nm in uno spettrofotometro a UV, oppure indirettamente, usando metodi colorimetrici come per esempio i saggi BCA o di Bradford.

Ecco alcune note applicative sulla quantificazione delle proteine che potete trovare interessanti:

• Misurate le proteine totali nei lisati cellulari con il lettore per micropiastre SpectraMax ABS Plus
• Quantificazione delle proteine con il lettore per micropiastre EMax Plus
• Quantificazione diretta delle proteine usando la micropiastra per microvolumi SpectraDrop
• Ottimizzate la quantificazione delle proteine basata su BCA sul lettore SpectraMax iD5