Imaging e analisi cellulare
Acquisizione e analisi di dati quantitativi per applicazioni su modelli basati su cellule
Imaging cellulare: Acquisizione e analisi
I ricercatori hanno a disposizioni varie opzioni per quanto riguarda i metodi di imaging cellulare, dalla microscopia a contrasto di fase che mostra le cellule intatte all’imaging a fluorescenza di singole molecole od organelli. L’analisi cellulare viene eseguita per valutare e misurare lo stato corrente delle cellule, come l’integrità cellulare, la tossicità, la vitalità e varie altre applicazioni di ricerca. Una parte integrante dell’analisi cellulare è la raccolta, analisi ed esportazione dei dati in un formato utile e significativo.
Flusso di lavoro per l’analisi cellulare
I protocolli per la coltivazione, la semina e il mantenimento di cellule variano a seconda dei diversi modelli cellulari; tuttavia, i passaggi descritti di seguito illustrano un flusso di lavoro generale per i saggi di imaging basati su cellule dalla preparazione iniziale del terreno fino all’analisi sperimentale a valle utilizzando un sistema di imaging ad alto contenuto e un software di analisi cellulare.
- Seminare le cellule nel contenitore prescelto (vetrini multipozzetto, piastre, micropiastre)
- Trattare le cellule: eseguire i trattamenti cellulari con i composti desiderati, se previsti nel flusso di lavoro del saggio
- Colorare per marcatori: se necessario, marcare le cellule con i fluorofori desiderati (coloranti fluorescenti, proteine fluorescenti, fusioni peptidiche, ecc.
- Acquisire l’immagine cellulare: collocare la piastra nel sistema di imaging cellulare e iniziare l’acquisizione delle immagini delle cellule vive
- Analizzare l’immagine cellulare: utilizzare un software di analisi per imaging cellulare per eseguire un’analisi quantitativa dell’immagine delle cellule vive
Accelerazione delle applicazioni di screening con l’imaging automatizzato e ad alto contenuto
Questo webinar tecnico sarà incentrato sulle applicazioni di screening ad alto contenuto, come quelle coinvolte nella ricerca sui virus, negli studi sulla crescita neuritica e nello sviluppo di modelli basati su organoidi. Le informazioni fornite saranno di interesse per i ricercatori che attualmente lavorano con saggi basati su cellule e utilizzano tecniche di imaging su cellule vive e per quelli che desiderano automatizzare e/o ottimizzare il loro attuale flusso di lavoro di imaging.
Tipi di metodiche di imaging cellulare
Quali che siano le vostre esigenze, da un sistema ad alto rendimento e ad alto contenuto a un sistema di facile utilizzo, le nostre soluzioni per imaging cellulare includono applicazioni di acquisizione e analisi adatte alle necessità di un laboratorio di screening o di ricerca. Qui abbiamo descritto brevemente varie metodiche utilizzate nell’imaging cellulare:
- La microscopia a contrasto di fase permette di osservare cellule intatte
- L’imaging a fluorescenza consente di osservare singole molecole od organelli
- La microscopia in campo chiaro è utile per la visualizzazione rapida di cellule intere
- La microscopia confocale è la tecnologia più adatta per ottenere immagini di alta qualità e per la ricostruzione 3D delle cellule
- L’imaging su cellule vive 4D combina la microscopia confocale con quella in time-lapse
- La microscopia automatizzata utilizza funzioni software e hardware che assicurano un’affidabile messa a fuoco in tutti i campi visivi, combinate con un sofisticato software di analisi delle immagini che permette di ottenere dati quantitativi riproducibili e soggettivi
Applicazioni e saggi basati su cellule di uso comune
Qui abbiamo riunito vari argomenti relativi ai saggi basati su cellule, dalle colture cellulari 3D alla ricerca sulle cellule staminali, nonché applicazioni per gli screening di tossicità e quelli sui cardiomiociti.
Risorse recenti
Flusso di lavoro per l’analisi delle immagini cellulari
Flusso di lavoro per l’analisi delle immagini cellulari
SEMINA DELLE CELLULE
Seminare le cellule aderenti o in sospensione nel contenitore prescelto, ad esempio piastre di coltura, vetrini multipozzetto e micropiastre. Incubare le cellule nelle condizioni di coltura normali (ossia 37 °C, 5% di CO2). Per le cellule aderenti, l’incubazione notturna delle cellule seminate fornirà loro il tempo necessario per attaccarsi e crescere.
Piastre a 96 o 384 pozzetti
Per la maggior parte delle colture cellulari per screening ad alto contenuto e ad alto rendimento vengono utilizzate micropiastre a 96 o 384 pozzetti.
TRATTAMENTO CON COMPOSTI
Se necessario per il protocollo, trattare le cellule con i composti di interesse.
I composti possono essere aggiunti alle cellule per un periodo compreso tra pochi minuti e vari giorni a seconda del meccanismo d’azione dei composti e della risposta biologica in studio. Ad esempio, i saggi di apoptosi e di internalizzazione dei recettori richiedono generalmente tempi di incubazione più brevi, mentre per i saggi di citotossicità multiparametrici occorrono periodi più lunghi. Nel caso di trattamenti prolungati, può essere necessario sostituire i composti durante l’incubazione.
COLORAZIONE PER MARCATORI
Le cellule vive possono essere colorate con una varietà di fluorofori o essere trasfettate/trasdotte con costrutti contenenti proteine di fusione con peptidi fluorescenti. Per la colorazione occorre seguire le istruzioni del produttore. La colorazione non è necessaria per tutte le applicazioni su cellule vive; esistono tecniche di imaging e analisi senza marcatura che permettono di seguire e monitorare le cellule utilizzando la sola microscopia in campo chiaro.
Kit del saggio
Kit del saggio affidabili e facili da utilizzare per la ricerca nel campo delle scienze naturali, la scoperta e lo sviluppo di farmaci e i saggi biologici. I nostri kit del saggio sono ottimizzati per l’uso sui nostri strumenti. Approfittate della possibilità di sottoporre a screening un maggior numero di composti in una fase più precoce del processo di scoperta farmacologica e di caratterizzare un profilo concentrazione-risposta completo dei composti in esame.
Gamma di soluzioni di imaging ad alto contenuto ImageXpress
I nostri sistemi per imaging e analisi ad alto contenuto offrono soluzioni scalabili flessibili, facilitando l’evoluzione del vostro sistema di pari passo con le vostre attività di ricerca. Sono provvisti di opzioni e moduli per soddisfare le vostre specifiche esigenze di ricerca, compresi obiettivi, filtri, modalità di imaging e condizioni ambientali.
ACQUISIZIONE DI IMMAGINI DELLE CELLULE VIVE
Per le acquisizioni in time-lapse continuo, configurare la durata totale della serie temporale e gli intervalli di imaging, ad es. acquisizione di immagini ogni ora per 24 ore.
È possibile eseguire acquisizioni in time-lapse discontinuo, che prevedono che la piastra venga prelevata e rimessa nell’incubatore e sottoposta a imaging in vari momenti diversi.
ANALISI DELLE IMMAGINI DELLE CELLULE
Analizzare le immagini con il software di analisi per imaging cellulare per generare letture multiparametriche per le risposte biologiche in studio. È possibile generare ed esaminare dati cinetici per le acquisizioni in time-lapse.
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Software di acquisizione e analisi per imaging cellulare
Il software di acquisizione e analisi delle immagini ad alto contenuto MetaXpress® è una soluzione completa per l’analisi ad alto contenuto che offre un flusso di lavoro integrato rigorosamente orchestrato. La gamma di moduli applicativi supporta una varietà di esigenze, dalla facilità d’uso alla progettazione brevettata di saggi. Il software include strumenti potenti ed eleganti per l’imaging 2D e 3D come l’analisi in time-lapse. Grazie alla nostra procedura guidata di impostazione dell’acquisizione, è possibile generare dati in pochi minuti.