Produzione di anticorpi monoclonali

In genere, il processo di produzione tradizionale degli anticorpi monoclonali (mAb) ha inizio con la generazione di cellule produttrici di mAb (ossia gli ibridomi) mediante la fusione di cellule di mieloma con splenociti che producono gli anticorpi desiderati (ad es. linfociti B). Di solito questi linfociti B provengono da animali, generalmente dai topi. Dopo la fusione cellulare, un elevato numero di cloni viene sottoposto a screening e selezionato in base alla specificità dell’antigene e alla classe delle immunoglobuline. Una volta identificate le linee cellulari di ibridoma candidate, ogni linea di interesse viene confermata, validata e caratterizzata mediante una varietà di saggi funzionali a valle. Al termine, la produzione dei cloni viene aumentata e hanno luogo ulteriori bioprocessi a valle.

Un tipico processo di produzione di anticorpi monoclonali.

Un tipico processo di produzione di anticorpi monoclonali

  1. Immunizzazione dei topi e isolamento degli splenociti - I topi vengono immunizzati con un antigene, dopodiché viene eseguito uno screening del loro sangue per rilevare la produzione di anticorpi. Gli splenociti che producono anticorpi vengono quindi isolati per la produzione di ibridomi in vitro.
  2. Preparazione delle cellule di mieloma - Le cellule di mieloma sono cellule immortalizzate che, una volta fuse con cellule della milza, possono generare ibridomi in grado di crescere in maniera illimitata. Le cellule di mieloma vengono preparate per la fusione.
  3. Fusione - Le cellule di mieloma e gli splenociti isolati vengono fusi insieme per formare ibridomi in presenza di polietilenglicole (PEG), che provoca la fusione delle membrane cellulari.
  4. Screening e prelievo dei cloni - I cloni vengono sottoposti a screening e selezionati in base alla specificità dell’antigene e alla classe delle immunoglobuline.
  5. Caratterizzazione funzionale - Tutte le potenziali colonie altamente produttive vengono confermate, validate e caratterizzate (ad es. con saggi ELISA).
  6. Aumento della produzione e rimozione degli agenti di selezione - Viene aumentata la produzione dei cloni che producono gli anticorpi desiderati e si procede alla rimozione degli agenti di selezione.
  7. Espansione - Si procede all’espansione dei cloni che producono gli anticorpi desiderati (ad es. con bioreattori o fiasche grandi).

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