Saggio di immunoassorbimento enzimatico (ELISA)

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Cos’è un ELISA?

L’ELISA (saggio di immunoassorbimento enzimatico) è una metodica usata per rilevare in modo quantitativo un antigene in un campione. Un antigene è una tossina o un’altra sostanza estranea, ad esempio il virus dell’influenza o un contaminante ambientale, che determina lo sviluppo di una risposta difensiva da parte del sistema immunitario dei vertebrati. La gamma dei potenziali antigeni è vasta, per cui i saggi ELISA vengono utilizzati in numerose aree di ricerca e in molti test per rilevare e quantificare gli antigeni in un’ampia varietà di tipi di campioni. Mediante i saggi ELISA è possibile analizzare lisati cellulari, campioni di sangue, alimenti e altro per rilevare specifiche sostanze di interesse.

Esistono quattro tipi principali di ELISA: diretto, indiretto, competitivo e a sandwich. Di seguito è descritto ciascun tipo di saggio, con un diagramma che illustra in che modo gli analiti e gli anticorpi vengono legati e utilizzati.

Procedura per eseguire un saggio ELISA a sandwich

La maggior parte dei saggi ELISA a sandwich viene eseguita in micropiastre e il fondo dei pozzetti delle piastre funge da superficie solida su cui vengono immobilizzati gli anticorpi e altri reagenti. Viene utilizzata una lavatrice per micropiastre per lavare via il materiale aspecifico presente nel pozzetto e un lettore di assorbanza per micropiastre ELISA rileva la variazione di colore che si verifica quando è presente l’antigene bersaglio. Quindi viene utilizzato un software per lettore per piastre per tracciare le curve standard e calcolare i risultati.

L’illustrazione qui di seguito mostra un flusso di lavoro per un tipico saggio ELISA a sandwich:

Flusso di lavoro per saggio ELISA \

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Passaggio 1: l’anticorpo di cattura viene immobilizzato nei pozzetti delle piastre ELISA

Passaggio 2: aggiunta del campione nel pozzetto – L’antigene presente nel campione si lega all’anticorpo di cattura.

Passaggio 3: lavaggio della micropiastra – Il materiale non legato viene lavato via, lasciando soltanto l’antigene di interesse

Passaggio 4: aggiunta dell’anticorpo di rilevazione – L’anticorpo di rilevazione coniugato a un enzima si lega a un secondo sito sull’antigene di interesse

Passaggio 5: lavaggio della micropiastra – Gli anticorpi non legati vengono lavati via, lasciando soltanto quelli specifici per il target di interesse

Passaggio 6: aggiunta del substrato – Il substrato viene convertito dall’enzima coniugato all’anticorpo di rilevazione, provocando una variazione di colore

Passaggio 7: lettura della piastra – Il lettore per micropiastre rileva il prodotto di reazione colorato e fornisce valori di densità ottica (Optical Density, OD)

Passaggio 8: calcolo dei risultati – La quantità di antigene presente in ciascun campione viene calcolata e analizzata

Anche se un ELISA è facile da allestire, la procedura del saggio è laboriosa e richiede tempo. Le soluzioni di automazione per il laboratorio per i flussi di lavoro dei saggi ad alto rendimento basati su piastre permettono di avere tempo per dedicarsi ad altro, aumentando il rendimento, l’efficacia e l’efficienza della procedura del saggio e la riproducibilità.

Visualizzate il protocollo ELISA

Flusso di lavoro ELISA automatizzato

Saggi ELISA e applicazioni

Il saggio di immunoassorbimento enzimatico è una tecnica analitica si uso comune eseguita in numerosi laboratori biotecnologici e di ricerca. Di seguito potete trovare una raccolta di note applicative ed esempi di ricerche e tecnologie correlate a saggi ELISA e applicazioni significative.

Risorse recenti

Flusso di lavoro di un protocollo ELISA

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Risorse per saggi ELISA