Cos’è un ELISA?
L’ELISA (saggio di immunoassorbimento enzimatico) è una metodica usata per rilevare in modo quantitativo un antigene in un campione. Un antigene è una tossina o un’altra sostanza estranea, ad esempio il virus dell’influenza o un contaminante ambientale, che determina lo sviluppo di una risposta difensiva da parte del sistema immunitario dei vertebrati. La gamma dei potenziali antigeni è vasta, per cui i saggi ELISA vengono utilizzati in numerose aree di ricerca e in molti test per rilevare e quantificare gli antigeni in un’ampia varietà di tipi di campioni. Mediante i saggi ELISA è possibile analizzare lisati cellulari, campioni di sangue, alimenti e altro per rilevare specifiche sostanze di interesse.
Esistono quattro tipi principali di ELISA: diretto, indiretto, competitivo e a sandwich. Di seguito è descritto ciascun tipo di saggio, con un diagramma che illustra in che modo gli analiti e gli anticorpi vengono legati e utilizzati.
Procedura per eseguire un saggio ELISA a sandwich
La maggior parte dei saggi ELISA a sandwich viene eseguita in micropiastre e il fondo dei pozzetti delle piastre funge da superficie solida su cui vengono immobilizzati gli anticorpi e altri reagenti. Viene utilizzata una lavatrice per micropiastre per lavare via il materiale aspecifico presente nel pozzetto e un lettore di assorbanza per micropiastre ELISA rileva la variazione di colore che si verifica quando è presente l’antigene bersaglio. Quindi viene utilizzato un software per lettore per piastre per tracciare le curve standard e calcolare i risultati.
L’illustrazione qui di seguito mostra un flusso di lavoro per un tipico saggio ELISA a sandwich:
Passaggio 1: l’anticorpo di cattura viene immobilizzato nei pozzetti delle piastre ELISA
Passaggio 2: aggiunta del campione nel pozzetto – L’antigene presente nel campione si lega all’anticorpo di cattura.
Passaggio 3: lavaggio della micropiastra – Il materiale non legato viene lavato via, lasciando soltanto l’antigene di interesse
Passaggio 4: aggiunta dell’anticorpo di rilevazione – L’anticorpo di rilevazione coniugato a un enzima si lega a un secondo sito sull’antigene di interesse
Passaggio 5: lavaggio della micropiastra – Gli anticorpi non legati vengono lavati via, lasciando soltanto quelli specifici per il target di interesse
Passaggio 6: aggiunta del substrato – Il substrato viene convertito dall’enzima coniugato all’anticorpo di rilevazione, provocando una variazione di colore
Passaggio 7: lettura della piastra – Il lettore per micropiastre rileva il prodotto di reazione colorato e fornisce valori di densità ottica (Optical Density, OD)
Passaggio 8: calcolo dei risultati – La quantità di antigene presente in ciascun campione viene calcolata e analizzata
Anche se un ELISA è facile da allestire, la procedura del saggio è laboriosa e richiede tempo. Le soluzioni di automazione per il laboratorio per i flussi di lavoro dei saggi ad alto rendimento basati su piastre permettono di avere tempo per dedicarsi ad altro, aumentando il rendimento, l’efficacia e l’efficienza della procedura del saggio e la riproducibilità.
Saggi ELISA e applicazioni
Il saggio di immunoassorbimento enzimatico è una tecnica analitica si uso comune eseguita in numerosi laboratori biotecnologici e di ricerca. Di seguito potete trovare una raccolta di note applicative ed esempi di ricerche e tecnologie correlate a saggi ELISA e applicazioni significative.
Risorse recenti
Flusso di lavoro di un protocollo ELISA
Il flusso di lavoro di un tipico protocollo di un saggio ELISA a sandwich prevede vari passaggi di aggiunta di reagenti, incubazione e lavaggio. Qui sono descritti i vari passaggi e le apparecchiature e gli strumenti necessari per eseguire il saggio ELISA, tra cui una lavatrice per micropiastre, un lettore di assorbanza per piastre ELISA e il software.