Scoperta di anticorpi mediante phage display
Phage display
Il phage display (o esposizione fagica) è una tecnica utilizzata per studiare l’interazione di proteine esposte sulla superficie di un batteriofago con altre molecole, come peptidi, DNA e altre proteine. La tecnica del phage display è comunemente utilizzata per scoprire le interazioni ad alta affinità tra anticorpi e antigeni, che svolgono un ruolo cruciale nella patogenesi virale, nei vaccini e in altri trattamenti.
Guardate questo video in cui Rebecca Kreipke, field applications scientist, illustra la nostra soluzione per accelerare il flusso di lavoro per il phage display.
Flusso di lavoro per il phage display
Soluzioni automatizzate per aumentare l’efficienza del flusso di lavoro per il phage display
Il flusso di lavoro per il phage display è un metodo affidabile, economico e facile da eseguire, attraverso il quale è possibile identificare leganti di antigeni ad alta affinità a partire da ampie librerie combinatoriali contenenti fino a miliardi di anticorpi con potenziale rilevanza clinica. Ciò lo rende particolarmente adatto a trarre benefici dall’aggiunta di soluzioni automatizzate, che vi permetteranno di ridurre lo sforzo manuale necessario per identificare i target anticorpali più promettenti e velocizzare il processo di scoperta.
Procedura del phage display
Passaggio 1: Panning
Il panning è un processo iterativo per l’arricchimento di fagi in una popolazione che possiede un’elevata affinità di legame per un target di interesse rispetto agli altri. Il processo ha inizio con l’arricchimento della popolazione di fagi ad alta affinità di legame mediante esposizione della libreria al proprio antigene di interesse, seguita dall’eluizione e amplificazione dei soli fagi che presentano i livelli di affinità di legame più elevati.
Passaggio 2: Prelievo di colonie
I batteriofagi selezionati nel passaggio precedente vengono poi clonati e prelevati allo scopo di isolare ciascun legante proteico specifico.
Passaggio 3: Interazioni antigene-anticorpo
Durante la fase di panning, i fagi che espongono le proteine con maggiore affinità di legame vengono selezionati rispetto a quelli che espongono proteine a minore affinità. Questo processo di selezione qualitativa deve essere validato mediante l’uso di immunodosaggi più quantitativi per valutare le interazioni antigene-anticorpo, come ad esempio saggi ELISA, di immunofluorescenza, HTRF, fissazione del complemento, agglutinazione e/o precipitazione.
Passaggio 4: Screening funzionale
In seguito alla caratterizzazione delle interazioni antigene-anticorpo, le molecole candidate vengono sottoposte a screening per l’attività funzionale (ad es. neutralizzazione virale o efficacia vaccinale), spesso mediante l’uso di saggi basati su cellule.
Tecnologia del phage display per la produzione di anticorpi
Il sistema QPix™ velocizza il flusso di lavoro per lo screening di anticorpi mediante phage display
La tecnica del phage display viene utilizzata in applicazioni industriali che vanno dal settore biotecnologico alla biologia sintetica in virtù delle sue capacità di alto rendimento per la determinazione delle interazioni proteiche e l’ingegnerizzazione delle proteine. Tuttavia, per selezionare i leganti ad alta affinità, o ligandi, in grado di riconoscere un target naive in una libreria di fagi (\~107 - 1012), i batteriofagi non leganti devono essere lavati via e i fagi che si legano specificamente alle molecole target vengono eluiti e raccolti mediante 3-5 cicli di panning. L’esecuzione di questo processo con i metodi convenzionali può essere laboriosa, specialmente quando si esegue simultaneamente lo screening di vari fagi selezionati con diversi antigeni. Per velocizzare la fase di screening, gli scienziati stanno introducendo nel loro flusso di lavoro nuove tecnologie come i sistemi QPix™, che permettono di accelerare lo screening degli anticorpi mediante phage display.
Il sistema QPix è la soluzione ideale per automatizzare la semina e il prelievo dei cloni, nonché come sistema completo per la gestione delle librerie di fagi.
- Prelievo a una velocità di 3000 cloni all’ora, con un’efficienza superiore al 98%.
- 8 ore di funzionamento non supervisionato al giorno
- Screening e prelievo di fino a 30.000 colonie al giorno
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