Lo University College di Londra utilizza il lettore SpectraMax i3x e il sistema FLIPR Tetra per sviluppare farmaci personalizzati
"Le mie ricerche sono fortemente incentrate su una migliore comprensione delle basi molecolari della salute e della malattia e l’obiettivo principale del mio lavoro è quello di chiarire il ruolo dei recettori presenti sulla superficie cellulare in questi processi"
Andrea Townsend-Nicholson
AZIENDA/UNIVERSITÀ
Dipartimento di Biologia Strutturale e Molecolare, University College London
MEMBRI DEL TEAM
Professoressa Andrea Townsend-Nicholson
PRODOTTI UTILIZZATI
Sistema di screening cellulare ad alto rendimento FLIPR
Lettore per micropiastre multimodale SpectraMax i3x
La sfida
Il Professor Andrea Townsend-Nicholson si interessa di medicina personalizzata, aiutando a sviluppare composti terapeutici su misura per le persone.
Le ricerche nel laboratorio della prof.ssa Townsend-Nicholson sono incentrate principalmente sulla comprensione delle modalità di trasduzione dei segnali extracellulari in risposte intracellulari. In particolare, l’obiettivo è quello di chiarire il ruolo dei recettori presenti sulla superficie cellulare in questi processi. I ricercatori utilizzano un approccio integrato basato su elaborazione ad alte prestazioni e lavoro sperimentale per sviluppare farmaci in grado di agire su specifici recettori sulla superficie cellulare. Questo approccio permette loro di sviluppare modelli informatici della struttura del recettore target per ciascun paziente, comprese eventuali mutazioni o variazioni genomiche nella sequenza proteica del recettore. I composti sviluppati possono essere testati sia in silico che a livello sperimentale. L’idea è quella di ridurre i costi e accorciare il tempo necessario per arrivare ad applicazioni cliniche per ciascun nuovo farmaco eseguendo la maggior parte del lavoro pesante a livello computazionale e poi procedendo a una verifica sperimentale per controllare che tutto funzioni come previsto. I ricercatori stanno attualmente sviluppando una “pillola dimagrante” anti-obesità utilizzando questo metodo. Il team è anche interessato allo sviluppo di nuove tecnologie, in particolare all’uso di tessuto ingegnerizzato per sviluppare architetture biologiche 3D per uso terapeutico.
Per le sue ricerche sui recettori presenti sulla superficie cellulare, il team aveva bisogno di una soluzione ad alto rendimento che permettesse di monitorare la mobilizzazione del calcio dipendente dai GPCR e dai canali ionici e le variazioni del potenziale di membrana associate all’attivazione di canali ionici e di proteine trasportatrici di ioni.
La soluzione
Il team ha eseguito saggi per la segnalazione del calcio e per il potenziale di membrana utilizzando il sistema di screening cellulare ad alto rendimento FLIPR® Tetra. Il sistema FLIPR viene anche adoperato per eseguire saggi per il cAMP utilizzando subunità di proteine G chimeriche che riconoscono recettori accoppiati a proteina Gi o Gs, ma attivano PLCß, invece di interagire con l’adenilil ciclasi.
Come metodo alternativo per la misurazione del cAMP, vengono eseguiti dal gruppo saggi hTR-FRET per il cAMP su un lettore per micropiastre multimodale SpectraMax i3x. Questo sistema viene anche utilizzato per quantificare il dsDNA per il sequenziamento NGS Illumina utilizzando i kit di saggi del dsDNA SpectraMax Quant. Inoltre, questi kit vengono adoperati a fini didattici con gli studenti di medicina e di bioscienze molecolari nell’ambito dei progetti Microbioma umano e Microbioma terrestre.
Lettore per micropiastre multimodale SpectraMax i3x
Sistema di screening cellulare ad alto rendimento FLIPR penta
Prodotti utilizzati
Trasformate rapidamente le vostre idee creative in saggi cellulari cinetici in tempo reale per identificare precocemente composti guida diretti contro target come i GPCR e i canali ionici. Il rinomato sistema FLIPR Tetra è rapido, affidabile ed estremamente facile da configurare. Questo sistema è ottimizzato per l’uso sia in fluorescenza che in luminescenza ed è facilmente adattabile al formato del proprio saggio con testine sostituibili dall’utente per 96, 384 e 1536 pozzetti.
Il lettore per micropiastre multimodale SpectraMax i3x esegue misurazioni di assorbanza, fluorescenza e luminescenza e offre la possibilità di aggiornamenti, tra cui western blot, imaging cellulare e cinetica rapida con iniettori, oltre a ulteriori modalità di rilevazione. I moduli di rilevazione configurabili dall’utente offrono la possibilità di studiare le vie cellulari e l’espressione proteica.
I risultati
Queste soluzioni hanno permesso alla prof.ssa Townsend-Nicholson di compiere progressi non solo nelle sue ricerche, ma anche nella sua attività didattica, offrendo ai giovani ricercatori la possibilità di incorporare saggi ad alto rendimento nel loro lavoro.
Il gruppo della prof.ssa Townsend-Nicholson è stato anche coinvolto nella validazione del kit del saggio del potassio FLIPR. Utilizzando il loro sistema FLIPR Tetra, i ricercatori hanno dimostrato che questi kit potevano essere adoperati per misurare l’attività funzionale del cotrasportatore catione-cloruro KCC2 umano usando un protocollo omogeneo senza lavaggio. Inoltre, hanno mostrato che, rispetto ai coloranti tradizionali, come il BTC-AM, il protocollo semplificato e l’elevata qualità del saggio, in combinazione con le funzionalità ad alto rendimento del sistema FLIPR Tetra, offrono una potente soluzione per studiare i modulatori del cotrasportatore hKCC2.
Risorse correlate
Nota applicativa
Sviluppo di un saggio per il trasportatore potassio-clururo basato su cellule utilizzando il kit di saggio del potassio FLIPR